[发明专利]一种用于染色体异常检测的文库构建方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于染色体异常检测的文库构建方法，该方法包括：

步骤A：提取样本gDNA，获得gDNA；

步骤B：将所述gDNA进行酶切处理，纯化，获得酶切产物；

步骤C：将所述酶切产物进行末端修复，纯化，得到平末端DNA片段；

步骤D：将所述平末端DNA片段进行3'端加A，得到3'端加A的DNA片段；

步骤E：将所述3'端加A的DNA片段进行加接头，纯化，得到加接头的DNA片段；

步骤F：将所述加接头的DNA片段进行PCR扩增，纯化，得到扩增产物；

其中，步骤B中所述的酶切处理使用的酶为dsDNA Fragmentase；

步骤C中所述末端修复使用试剂包括：1μL T4 DNA聚合酶，1μL T4多聚核苷酸激酶、5μL 10×多聚核苷酸激酶缓冲液及1μL dNTP；

步骤D中所述3'端加A使用试剂包括：0.5μL Klenow片段(3'-5'exo-)、2.5μL dATP及2.5μL 10×缓冲液；

步骤F中所述PCR扩增的扩增引物包括：

Ann引物序列(SEQ ID NO:1)：

5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGAC-3'

Index引物序列(SEQ ID NO:2)：

5'-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATANNNNNNNGTGACTGGAGTTC-3'；

其中，N为随机碱基。

2.根据权利要求1所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤A中样本为羊水、脐血、全血、组织中任意一种。

3.根据权利要求1所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤B中gDNA的量为8～15ng。

4.根据权利要求1所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤B的酶切处理的条件为37℃50分钟。

5.根据权利要求1所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤C的末端修复的条件为20℃30分钟。

6.根据权利要求1所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤D的3'端加A的反应条件为37℃30分钟。

7.根据权利要求1所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤F的PCR扩增条件为94℃预变性2分钟、(94℃变性15秒、62℃退火30秒、72℃延伸30秒)17个循环、72℃延伸10分钟、4℃保存。

8.一种用于染色体异常检测的文库构建试剂盒，其用于实施权利要求1～7中任一项所述的文库构建方法，其包括：

用于所述酶切处理的试剂；

用于所述末端修复的试剂；

用于所述3'端加A的试剂；

用于所述加接头的试剂；

用于所述PCR扩增的试剂；

用于所述纯化的试剂。