[发明专利]一种基于CdSe量子点的赭曲霉素A免疫传感器的制备及其检测方法

权利要求书

1.一种基于CdSe量子点的赭曲霉素A免疫传感器的制备方法，其特征在于包括碳纳米管修饰电极的制备，聚乙二醇的修饰，包被OTA抗原的修饰；

（1）碳纳米管修饰电极的制备：

a、30 mg直径40-60 nm碳纳米管分散在60 mL 30% HNO₃，混合超声搅拌均匀；

b、将步骤a得到的混合液140℃油浴回流24 h；

c、过滤、洗涤到pH约为7.0左右，得到水溶性较好的羧基化碳纳米管；

d、取5 μL 1 mg/mL步骤c制备的羧基化碳纳米管均匀滴涂在表面洁净的直径3 mm玻碳电极表面，室温下晾干，保存于4 ^oC备用；

（2）聚乙二醇的修饰：

在制备的工作电极表面滴涂5 μL 2 mg/mL 聚乙二醇，用于固定OTA，清洗晾干，保存于4 ^oC备用；

（3）包被OTA抗原的修饰：

在制备的工作电极表面滴加10 μL 400 μg/L OTA抗原，湿盒温育1小时后，用0.01 MpH 7.4 （0.05% Tween-20）磷酸缓冲溶液（PBST）淋洗修饰电极，滴涂10 μL 5% 牛血清蛋白，封闭电极上的非特异性活性位点，保存于4 ^oC备用。

2.利用权利要求1制得的基于CdSe量子点的赭曲霉素A免疫传感器检测OTA的方法，其特征在于包括CdSe量子点探针的制备，抗体和样品溶液的温育，抗体浓度的优化，CdSe量子点探针和免疫复合物的反应，电化学检测方法的构建，检测条件的优化，标准曲线的绘制，实际样品的检测。

3.根据权利要求2构建的OTA免疫传感器检测OTA的方法，其特征在于CdSe量子点探针的制备：

a、将20 mL的巯基乙酸注入 50mL 2 mM的CdCl₂溶液中，用 1M NaOH调节pH至10，通高纯氮气30分钟除氧之后，将0.7 mL 70 mM的NaHSe (用Se粉和NaBH₄在二次水中隔绝空气反应制得)缓慢注入其中，得到了澄清亮黄色的CdSe量子点前驱体溶液；合成量子点所用的Cd²⁺:Se^2-: 巯基乙酸的最终摩尔比为1:0.5:2.5；将得到的溶液在 100 °C下加热4h之后得到巯基乙酸包裹的CdSe量子点；溶液冷却之后，在 6000 rpm的转速下超滤 5 min (使用10K的超滤管，购自Mipore公司)，除去未反应的物质，收集上层溶液，置于4 °C环境下避光保存，该CdSe量子点的粒径约为 2 nm；b、取步骤a得到的CdSe量子点溶液0.2 mL，入15.6 mg 羊抗鼠二抗 （Ab₂），然后加入50 mL 1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺混合液 (1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的浓度为10mg/mL、N-羟基琥珀酰亚胺的浓度为5mg/mL)活化2 h, 产物离心洗涤，复溶于0.5mL 1%BSA溶液，得到CdSe量子点标记的羊抗鼠二抗（CdSe量子点探针）溶液，保存于4 ^oC备用。

4.根据权利要求2构建的OTA的免疫传感器检测OTA的方法，其特征在于OTA抗体和样品的温育：5 mL 不同浓度的OTA标准溶液或样品与5 mL 稀释一定倍数OTA抗体混合制备温育液；将温育液滴到OTA免疫传感器表面，将其置于25 ^oC 温育1 h，小心地用0.01 M pH 7.4PBST冲洗，保存于4 ^oC备用；OTA抗体的优化：对OTA抗体的浓度进行优化，采用稀释150倍数的OTA抗体为最佳抗体浓度；CdSe量子点探针和免疫复合物的反应：将10 mL的CdSe量子点探针滴涂到制备的修饰电极表面，将其置于25 ^oC 湿盒中温育1 h，小心地用0.01 M pH7.4 PBST冲洗，保存于4 ^oC备用。