[发明专利]一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法

说明书

本发明提供一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法，通过在Fe₃O₄磁纳米粒子悬液中添加1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺进行活化后，与适配体DNA1偶联制备Fe₃O₄‑DNA1悬液；在金纳米粒子上修饰适配体互补链DNA2及乙酰胆碱酯酶，形成DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物；Fe₃O₄‑DNA1悬液、待测试样、DNA2‑AuNPs‑AchE聚合物溶液混合，检测pH。本发明提出的方法，以金纳米材料为载体进行乙酰胆碱酯酶和互补链的功能化，通过目标物驱动功能化金/磁纳米粒子的组装，建立目标物浓度与pH值的线性关系，是一种简便快捷、高灵敏度、高选择性的检测方法。

技术领域

本发明属于检测领域，具体地，涉及一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法。

背景技术

近几年，与双酚A相关的食品安全事件发生频繁，对人们的身心健康都产生了一定的影响和危害。双酚A是生产聚碳酸酯和环氧树脂等多种高分子材料的主要原料，也可用于抗氧剂、涂料、农药等精细化工品的生产。食品中双酚A的残留主要来源于食品原材料和食品包装材料：(1)双酚A在环境中难以降解，广泛存在于自然界中，尤其存在于环境水和塑料制品中，并在生物体内富集，通过食物链进入食品中；(2)由于双酚A是脂溶性的，因此在含脂肪较高的罐头等制品中，双酚A还可通过食品包装容器和塑料薄膜渗入食品中；(3)含有双酚A的物品经反复使用或暴露于高热环境也会导致双酚A浸入，进而被人体摄入。因此双酚A无处不在，从矿泉水瓶、婴儿奶瓶、医疗器械、各种罐头食品，甚至是眼镜片以及其他日用品的原材料中，都有它的身影，与我们的日常生活密切相关。由于双酚A的化学结构类似乙烯雌酚和雌二醇，因此也具有了与其他环境激素一样的生物效应，其能够通过模仿或干扰内源性雌激素从而发挥出一种拟雌激素作用。在生物体的生殖遗传、生长发育过程中，双酚A对机体免疫系统、呼吸系统、神经系统等各种方面均会产生不利的影响。

现阶段已报道关于双酚A的常用检测方法主要有色谱法(液相色谱法、液-质联用法、气相色谱法、气-质联用法)、分光光度法、荧光分析法、电化学分析法及酶联免疫法等。色谱法对样品的前处理过程要求严格，分析繁琐费时。分光光度法和荧光分光光度法仪器设备成本低，操作步骤简单，但检测方法的灵敏度相对偏低；电化学分析法虽然成本低，但双酚A在裸电极上电化学响应差，且易造成电极表面钝化，需对电极进行修饰实现增敏和抗污染。这些较为成熟的研究方法，都存在着明显的不足，同时难以实现原位检测。

发明内容

针对本领域存在的不足之处，本发明针对现有双酚A检测所依赖大型检测仪器，无法实现原位检测的不足，提供了一种基于乙酰胆碱酯酶放大原理，通过通用型pH试纸或pH计对双酚A实现定量检测的方法。

实现本发明目的的技术方案为：

一种基于乙酰胆碱酯酶信号放大原理检测双酚A的方法，包括操作：

通过在Fe₃O₄磁纳米粒子上修饰EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，制成活化磁纳米粒子，再与DNA1(5′-NH3-(T)10-CCGGTGGGTG GTCAG GTGGG ATAGC GTTCC GCGTA TGGCC CAGCG CATCA CGGGT TCGCA CCA-3′)反应，制得Fe₃O₄-DNA1悬液。

在金纳米粒子上修饰适配体DNA1的互补链DNA2及乙酰胆碱酯酶(AchE)，形成DNA2-AuNPs-AchE聚合物并分散于磷酸缓冲液中；