[发明专利]一种筛选I型鸭肝炎病毒3C蛋白抑制剂的试剂盒

权利要求书

1.一种筛选I型鸭肝炎病毒3C蛋白抑制剂的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括可溶性I型鸭肝炎病毒3C蛋白，酶解反应缓冲液，两端分别连接荧光基团和淬灭基团的多肽底物，

所述多肽底物为Dabcyl-ASFMNQSKVRRFE(EDANS)-COOH，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，N端连接4’-（4’-二甲基氨基叠氮苯）苯甲酸；C端连接5’-（2’-氨乙基氨基萘-1磺酸），

所述可溶性I 型鸭肝炎病毒3C蛋白的制备方法为，将SEQ ID NO.3所示第3~574位核苷酸连接于pET-32(a)+载体的多克隆酶切位点处，然后以大肠杆菌BL21为宿主菌，在Amp抗性的LB培养基中活化后，在IPTG终浓度为0.2～1.4mmol/L、温度为16~37℃条件下诱导表达2～12小时，表达获得可溶性I 型鸭肝炎病毒3C蛋白。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述诱导表达为在IPTG终浓度为1.0mmol/L、温度为16℃条件下诱导表达10小时。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述诱导表达后还包括纯化步骤，具体如下：收集菌液，在 12000r/min 条件下离心10min后收集菌体，收集的菌体用平衡缓冲液悬浮，然后在冰浴下超声，将破碎后的菌体在4℃、12000r/min条件下离心10min，收集上清，上清用 Ni²⁺-NTA 琼脂糖凝胶柱纯化，得纯化的可溶性I型鸭肝炎病毒3C蛋白；所述平衡缓冲液各组分浓度如下：50mM NaH₂PO₄·2H₂O，300mM NaCl。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述冰浴下超声为在冰浴条件下超声破碎6次，30sec/次，每次之间间隔30sec。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述酶解反应缓冲各组分浓度如下：20mM pH7.0的Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，5mM DTT，体积分数10%的甘油。

6.根据权利要求1~5任一项所述的试剂盒筛选I型鸭肝炎病毒3C蛋白抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述可溶性I型鸭肝炎病毒3C蛋白与待筛选化合物孵育，再加入两端分别连接荧光基团和淬灭基团的多肽底物，在温度为4~50℃，pH为5.0~10条件下反应，然后在340nm激发光和490nm发射光条件下检测荧光强度。