[发明专利]一种特异性结合口蹄疫非结构蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体7D7、含该单克隆抗体的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒及其应用。本发明提供抗体检测试剂盒具有高灵敏度，并可明显增宽检测的线性范围；检测时不受动物种属限制，适用于偶蹄类动物口蹄疫疾病的大规模筛查。含单克隆抗体7D7的偶联物制备的疫苗，可去除非结构蛋白，免疫动物后可避免FMDV非结构蛋白抗体的干扰，从而准确区分感染动物和免疫动物。

技术领域

本发明涉及口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体及含该单克隆抗体的检测试剂盒等应用，属于生物医药领域。

背景技术

口蹄疫(Foot and Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot andMouthDisease Virus，FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染的烈性传染病。该病可感染70余种家畜和野生动物，以牛、羊、猪为主，感染发病率高达100％，易出现发热、跛行和在皮肤及其黏膜上出现泡状斑疹等症状，特别地成年易感动物死亡率为5％～20％，幼畜的死亡率为50％～80％。该病一旦爆发则迅速传播，作为国际兽医局OIE及我国认定的必需通报的烈性传染病，已经对世界各国造成了巨大的经济损失。鉴于我国防治该病的主要措施是实行免疫接种，对牛、羊、猪等易感畜群每年定期注苗2-3次。因此，在检测和防治该病的发生、活畜检疫等方面，迫切需要建立准确、快捷的区分自然感染动物和免疫动物的诊断方法，特别地，鉴别免疫动物和自然感染动物也是OIE判定一个国家有无口蹄疫流行的依据之一。

近年来，中国、英、美、荷兰等各国学者对口蹄疫病毒的非结构蛋白(Non-Structural Protein，Nsp)2C、3A、3B、3ABC等片段作了大量细致的研究，建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)，是目前研究较多的不依赖于血清型的感染状况检测评估的方法。ELISA中HRP酶通过催化反应催化TMB底物使其发生颜色变化，并采用比色法检测样本中抗体的含量，而显色方法易受环境和底物等因素影响，且不同试剂盒采用的非结构蛋白的不同，所检测的灵敏度和特异性均有差异，检测范围较窄，易造成假阴性。

特别地，目前主要是通过接种灭活疫苗以控制该病的流行，而口蹄疫属于烈性传染病，对于该病的防治采用强制免疫和发现后全部动物宰杀的措施，因此在生产中区分免疫动物和自然感染动物显得尤其关键。但灭活疫苗仅用过滤工艺技术去除有限的细胞碎片故而纯化不彻底，导致免疫后机体产生非结构蛋白抗体，对鉴别免疫动物和自然感染动物造成干扰。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体及其应用，该单克隆抗体可用于制备口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒。

本发明涉及一种特异性结合口蹄疫病毒非结构蛋白单克隆抗体7D7的可变区序列，其中，1)重链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.2所示的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；2)轻链可变区氨基酸序列为SEQID No.4所示的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。

本发明还涉及具有上述可变区序列的抗体或其片段。

本发明还涉及一种抗体检测试剂盒，所述抗体检测试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体7D7，包被有口蹄疫病毒抗原的支持介质，以及用于对口蹄疫病毒的抗原抗体反应进行检测的检测试剂、阴性对照、阳性对照。

本发明含单克隆抗体7D7的抗体检测试剂盒，具有高灵敏度，可明显增宽检测的线性范围；检测时可不受动物种属限制，适用于偶蹄类动物口蹄疫疾病的大规模筛查，为尽早开展疫病防控工作奠定基础。

本发明还涉及含所述单克隆抗体7D7的偶联物，其中，所述单克隆抗体7D7偶联物为其绵羊红细胞偶联物或其琼脂糖凝胶偶联物。