[发明专利]一种皮肤干细胞活性素的制备方法及其应用

权利要求书

1.皮肤干细胞活性素在霜剂化妆品中的用途，其特征在于，皮肤干细胞活性素的制备方法，包括以下步骤：

S1、胎盘间充质干细胞的分离：取临床正常剖宫产的新鲜胎盘组织，无菌条件下分离胎盘中部内层组织剪成1cm×1cm×1cm的大小，用400-600u/ml的青霉素浸泡10-30min，用4℃D-Hank’s液冲洗3遍，用胰蛋白酶0.1-0.2g/mL和胶原蛋白酶0.05-0.08g/mL于37℃下消化30-60min，200目过滤网过滤收集组织细胞，红细胞裂解液4℃水浴3-5min去除红细胞即得；

S2、胎盘间充质干细胞的接种培养与诱导分化：将步骤S1得到的胎盘间充质干细胞接种在皮肤干细胞培养基中，于37℃、5％CO₂、培养箱中孵育15-25h，弃去培养基，重新加入新鲜的皮肤干细胞培养基中，待皮肤干细胞接近80-90％融合时，进行传代扩增培养；

S3、皮肤干细胞活性素的制备：将步骤S2中接种在皮肤干细胞培养基中的胎盘间充质干细胞扩增5-10代，收集培养上清液，将上清液用0.22μm的无菌过滤器过滤，合并滤液即得；

步骤S1所述的皮肤干细胞培养基包括以下组分及其浓度：所述的皮肤干细胞培养基包括以下组分及其浓度：基础培养基13.5mL、胰岛素20mg/L、L-谷氨酰胺5mg/L、表皮生长因子8μg/L、成纤维细胞生长因子2μg/L、神经生长因子0.88μg/L、糖皮质激素175μg/L、柠檬酸铁铵1mg/L、硝酸铁0.5mg/L、EDTA-2Na6mg/L、虾青素5mg/L、黄芩甙元0.1mg/L、飞燕草素35μg/L和桑色素3ng/L；

所述的基础培养基为DMEM/F12培养基；

所述的霜剂化妆品包括以下组分及其质量百分比：

皮肤干细胞活性素10-15％、羊毛醇2-5％、白蜂蜡5-10％、银耳多糖0.2-0.4％、SOD4-6％、肌肽2-4％、壳寡糖1-3％、L-苹果酸2-5％、蜂胶2-4％和水47.6-71.8％。

2.根据权利要求1所述的皮肤干细胞活性素在霜剂化妆品中的用途，其特征在于，所述的霜剂化妆品由以下组分及其质量百分比组成：

皮肤干细胞活性素12.5％、羊毛醇3.5％、白蜂蜡7.5％、银耳多糖0.3％、SOD5％、肌肽3％、壳寡糖2％、L-苹果酸3.5％、蜂胶3％和水59.7％。