[发明专利]单管巢式PCR反应体系和扩增方法在审
| 申请号： | 201710640979.2 | 申请日： | 2017-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN109321642A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 盛司潼;黄思强 | 申请（专利权）人： | 广州康昕瑞基因健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510000 广东省广州市萝*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单管 扩增 外引物 退火 互补序列 巢式PCR 变性解链 结合序列 目标产物 内引物 靶区 分子生物学领域 巢式PCR扩增 双链DNA模板 基因工程 碱基互补 双链结构 引物 保证 | ||
1.一种单管巢式PCR反应体系，其特征在于：反应体系中包括双链DNA模板、外引物对和内引物对，所述外引物从5’端到3’端包括互补序列和靶区结合序列，所述靶区结合序列远离互补序列的末端与所述互补序列的碱基互补，所述外引物用于在第一退火温度下对变性解链的DNA模板扩增并获得中间产物，所述内引物用于在第二退火温度下对变性解链的中间产物扩增并获得目标产物，所述外引物在第二退火温度下形成引物双链结构。
2.根据权利要求1所述的单管巢式PCR反应体系，其特征在于：所述引物双链结构包括引物发卡结构或引物二聚体结构。
3.根据权利要求2所述的单管巢式PCR反应体系，其特征在于：所述外引物对包括第一外引物和第二外引物，所述引物双链结构为第一外引物和第二外引物之间形成的双链结构。
4.根据权利要求2所述的单管巢式PCR反应体系，其特征在于：所述外引物对包括第一外引物和第二外引物，所述引物发卡结构包括第一外引物或第二外引物自身形成的双链结构。
5.根据权利要求1所述的单管巢式PCR反应体系，其特征在于：所述第一退火温度的范围是65-72℃，所述第二退火温度的范围是50-62℃。
6.根据权利要求5所述的单管巢式PCR反应体系，其特征在于：所述第一退火温度为65度，所述第二退火温度为52度。
7.一种单管巢式PCR扩增方法，其特征在于包括：
建立反应体系，所述反应体系中包括双链DNA模板、外引物对和内引物对，所述外引物从5’端到3’端包括互补序列和靶区结合序列，所述靶区结合序列远离互补序列的末端与所述互补序列的碱基互补；
进行一扩反应，在第一退火温度下通过外引物对实现对变性解链的DNA模板扩增并获得中间产物；
进行二扩反应，在第二退火温度下通过内引物对中间产物扩增并获得目标产物，所述外引物在第二退火温度形成引物双链结构。
8.根据权利要求7所述的单管巢式PCR扩增方法，其特征在于：所述引物双链结构包括引物发卡结构或引物二聚体结构。
9.根据权利要求8所述的单管巢式PCR扩增方法，其特征在于：所述外引物对包括第一外引物和第二外引物，所述引物双链结构为第一外引物和第二外引物之间形成的双链结构。
10.根据权利要求8所述的单管巢式PCR扩增方法，其特征在于：所述外引物对包括第一外引物和第二外引物，所述引物发卡结构包括第一外引物或第二外引物自身形成的双链结构。
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