[发明专利]一种猪伪狂犬病毒的分离方法

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒的分离方法，其特征在于由以下步骤组成：

1）用棉拭子蘸取隐性感染猪的唾液或粪便，置于PH为6.5-7.5的经4℃遇冷的1-3 ml的病毒溶解液中，混合均匀，置于4℃静止3-5min，使唾液或粪便中的病毒完全溶于溶解液中，经离心、滤膜过滤后得到病样处理液，置于-20℃保存；

所述的病毒溶解液每1000ml由以下成分组成：氯化钠1-5 g、六水氯化镁0.5-3g 、碳酸氢钠0.1-1 g、苦参碱2-6 mg、海藻糖1-5 mg、三磷酸腺苷二钠0.8-3 g、二水磷酸二氢钠0.1-1 g、氯化钾0.05-0.5 g；将以上各成分充分混合后，溶于1000ml双蒸水中，经0.22um滤膜进行过滤即得；

2）将病样处理液按0.2ml/只经腹腔注射接种于8周龄Balb/c小鼠中，观察至48-72 h，无菌取病死鼠的脑、肺、脾组织0.3-0.6 g，用均浆机研碎至均匀的组织液，按1:1-1:3添加经4℃遇冷的病毒溶解液，混合均匀，置于4℃静止3-5min，经离心、滤膜过滤后得到小鼠病料滤液，置于-20℃保存；

3）取1ml小鼠病料滤液接种于已铺满70-80% ST细胞的T25细胞瓶中，置于CO₂培养箱中培养，待70-80%细胞呈拉网状病变，进行收毒，按1:1-1:3添加经4℃遇冷的病毒溶解液，混合均匀，置于4℃静止3-5min，置于-20℃保存，即得到PRV细胞病毒液。

2.如权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒的分离方法，其特征在于所述的步骤1）和2）中离心、滤膜具体为：3000-5000 r/min离心5-10min，取上清液，依次再通过0.45um、0.22um的滤膜进行过滤。

3.如权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒的分离方法，其特征在于所述的步骤3）中CO₂培养箱条件为37℃、5%的CO₂培养箱培养72-96h。

4.如权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒的分离方法，其特征在于所述的病毒溶解液每1000ml由以下成分组成：氯化钠2-4 g、六水氯化镁0.8-2.4g 、碳酸氢钠0.2-0.8 g、苦参碱3-4 mg、海藻糖2-4 mg、三磷酸腺苷二钠1.2-2.4 g、二水磷酸二氢钠0.2-0.8 g、氯化钾0.1-0.3 g。