[发明专利]一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备及其应用

说明书

本发明公开了一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备，将CD8leader、人源化抗TNFR2的单链抗体、CD8的铰链区和跨膜区、CD3ζ胞内信号区依次串联构成，得到融合基因片段Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ，将所述融合基因片段Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ插入慢病毒表达载体，包装成携带Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带Leader‑scFv(TNFR2)‑CD8‑CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，得到靶向免疫检测点TNFR2的CIK，该发明能够针对恶性肿瘤精准治疗。

技术领域

本发明涉及新医药技术领域，更具体的说，是一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备及其应用。

背景技术

恶性肿瘤发病率和死亡率居高不下，是威胁人类健康的头号杀手。传统治疗方法对中晚期患者疗效非常有限，临床上亟待研究更为有效的治疗方法。免疫细胞治疗中的CIK(cytokine induced killer)细胞疗法已在临床广泛应用并取得一定的治疗效果。然而由于恶性肿瘤微环境相对复杂，免疫细胞浸润不足，且浸润的免疫细胞受不同调节性T细胞亚群(regulatory T cells，T_reg)及其产生的转化生长因子β₁(TGF-β₁)、白细胞介素(IL)4、IL-10等抑制分子的严密控制，阻止其激活与趋化，从而形成了肿瘤免疫逃逸，使免疫细胞不仅不能清除肿瘤细胞，还通过其分泌的细胞因子促进肿瘤生长。因此如何突破肿瘤微环境的限制，提高免疫治疗的效果是目前研究的热点和难点。

免疫检测点治疗如抗CTLA-4和抗PD-1/PD-L1治疗是以效应T细胞(T effectorcell，T_eff)的调节通路为靶点来提高抗肿瘤效应的治疗方法，已取得重要临床进展并成为一种新的抗癌武器。这类治疗的关键在于阻断肿瘤微环境中T_eff的免疫抑制信号，解除T_eff与肿瘤细胞之间的免疫抑制信号通路，恢复T_eff消灭肿瘤细胞的作用。肿瘤坏死因子受体II(Tumor necrosisfactor receptor 2，TNFR2)是免疫检测点的新成员之一，在肿瘤微环境中免疫抑制性的T_reg(CD4⁺CD25^hiFoxP3⁺)和很多类型的癌细胞如：肾癌、结肠癌、霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤和卵巢癌的表面上表达中高度表达。

由此本发明选择TNFR2作为针对恶性肿瘤干细胞治疗研究的靶点，构建了靶向TNFR2靶点的抗TNFR2嵌合抗原受体[TNFR2，chimeric antigen receptor，CAR(TNFR2)]，并且将所制备的CAR(TNFR2)装载到CIK细胞表面，使其与CIK细胞融为一体发挥靶向杀伤TNFR2阳性的肿瘤细胞和T_reg细胞作用，从而突破肿瘤微环境的限制，极大的增强T_eff的增殖活性和肿瘤杀伤效果。

发明内容

本发明的目的是为了突破肿瘤微环境的限制，提高免疫效果，提供一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备及其应用。

本发明的方案是：

一种靶向免疫检测点TNFR2的CIK的制备，将CD8 leader、人源化抗TNFR2的单链抗体、CD8的铰链区和跨膜区、CD3ζ胞内信号区依次串联构成，得到融合基因片段Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ，将所述融合基因片段Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ插入慢病毒表达载体，包装成携带Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带Leader-scFv(TNFR2)-CD8-CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，得到靶向免疫检测点TNFR2的CIK。