[发明专利]利用转录组测序的SSR分子标记鉴定火龙果种质的方法

权利要求书

1.一种利用转录组测序的SSR分子标记鉴定火龙果种质的方法，其特征在于：EST-SSR标记引物为如下的1对或任意几对：

2.根据权利要求1所述的利用转录组测序的SSR分子标记鉴定火龙果种质的方法，其特征在于包括如下步骤：

S1，取火龙果幼嫩茎尖，用于提取基因组DNA；

S2，基于火龙果转录组测序的序列设计SSR引物，并进行PCR扩增体系优化；

S3，PCR采用10 µl反应体系：包含10-50 ng模板DNA 1-2 µl，正、反向引物各0.2-0.5 µl，5 µl Mix及适量ddH₂O；

S4，PCR反应程序为：94℃预变性5 min；94℃反应30 s，54-63℃反应30 s，72℃反应30s，进行35个循环；72℃延伸8 min；4℃最终保存；

S5，PCR扩增产物先进行引物初步筛选，然后再进行多态性筛选，根据谱带的有无和大小来判定结果。

3.根据权利要求2所述的利用转录组测序的SSR分子标记鉴定火龙果种质的方法，其特征在于：S1中所述幼嫩茎尖是指新采集或-80℃下保存的火龙果茎尖。

4.根据权利要求2所述的利用转录组测序的SSR分子标记鉴定火龙果种质的方法，其特征在于：S3中Mix包括0.1 U/μl Taq polymerase、500 μM dNTP、20 mM Tris-HCl、100 mMKCl、3 mM MgCl₂。

5.根据权利要求2所述的利用转录组测序的SSR分子标记鉴定火龙果种质的方法，其特征在于：所述初步筛选是用2%琼脂糖电泳，依据电泳结果进行初步筛选；所述多态性筛选是用10%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳进行。