[发明专利]RSV-PCV联合疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种RSV‑PCV联合疫苗及其制备方法，所述疫苗以肺炎链球菌多糖‑蛋白载体‑RSV特异性蛋白为抗原，其中：该多糖为13价肺炎链球菌多糖，蛋白载体为大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)蛋白和霍乱弧菌肠毒素B亚单位蛋白(CTB)的融合蛋白；RSV特异性蛋白经化学反应连接到肺炎链球菌多糖‑蛋白载体结合物C端。本发明的优点在于可同时诱导机体产生抗RSV及肺炎链球菌的双重免疫反应。

技术领域

本发明涉及一种RSV-PCV联合疫苗及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

一、呼吸道合胞病毒及其流行病学

呼吸道传染病至今仍然是世界上导致死亡的主要原因之一，而流感病毒(Influenza virus，FLU)和呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)则是重要的呼吸道病原体。目前，流感已有安全有效的不同类型疫苗，为流感的防控提供了保证。而RSV由于自身免疫特性，投入临床的疫苗很少，为其防控提出了挑战。至今仅有美国MedImmune公司研制生产的流感三价减毒活疫苗通过FDA审批。RSV是婴幼儿下呼吸道感染最重要的病原，也是造成老年人和免疫缺陷成人住院和因肺炎死亡的重要原因。据统计，6个月以内的婴幼儿因RSV感染导致住院率达70％，2周岁以内的儿童感染率甚至高达99％。RSV因其致病范围广，病情高发，且会引起严重的并发症等，给人类健康和生命安全造成了严重威胁。世界卫生组织已将RSV疫苗定为优先发展的疫苗之一。

RSV属副粘病毒科肺病毒属，是单股负链RNA病毒，含A、B两个血清型。RSV基因组全长约15Kb，编码10种主要蛋白，包括由三个跨膜蛋白(G、F和SH)、两个基质蛋白(M和M2)、三个核衣壳蛋白(N、P和L)及两个非结构蛋白(NS1和NS2)构成，其中融合蛋白F(Fusionprotein，F)和附着蛋白G(Attchment protein，G)是RSV激发机体产生保护性抗体最重要的病毒蛋白。G蛋白高度差异，根据G蛋白抗原性差异RSV可分为A和B两个亚型；RSV的F蛋白高度保守，介导病毒包膜和宿主细胞膜的融合，使得病毒成功入侵宿主细胞并且还可引起相邻细胞质膜间的融合促进体外合胞体的形成。针对RSV F和G糖蛋白的中和抗体能有效防止RSV再感染，因此RSV F和G蛋白已被公认为RSV的毒力致病分子和保护性抗原。

对于RSV而言，20世纪60年代，Fulginiti VA等研制的福尔马林灭活疫苗(FI-RSV)由于诱发Th2型免疫过激导致2名儿童死亡和80％住院，以失败告终。目前RSV疫苗的研究主要集中在载体疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、VLP疫苗，但至今无获批的RSV疫苗可用。RSV疫苗的研究一直是国际社会关注的焦点，从已有的研制中的RSV疫苗可见，注射免疫不能产生有效的粘膜和细胞免疫反应且免疫保护效果受限、DNA疫苗存在潜在安全性以及全长F、G蛋白疫苗存在潜在Th1/Th2失平衡等瓶颈问题亟待解决。阻碍RSV疫苗研制的主要障碍有以下几点：一是大多数动物模型包括黑猩猩等均为半敏感感染/复制模型，因此难以完全再现RSV的致病性；二是作为疫苗主要目标人群的新生儿免疫系统发育不成熟，同时体内存在的母传抗体能介导免疫干扰；三是RSV存在两种不同抗原亚型，而且自然感染难以产生有效的免疫保护作用；四是福尔马林灭活疫苗(FI-RSV)不仅不能防止婴幼儿感染，在嗣后的自然感染中，接种疫苗的儿童病情加重(即疾病增强作用)、甚至死亡。

近年来的研究表明，以载体为基础构建的RSV疫苗有望用于新生儿。活载体疫苗的种类主要包括病毒载体疫苗和细菌载体疫苗。RSV病毒载体疫苗主要包括：痘苗病毒(vaccinia virus)载体疫苗、腺病毒(adenovirus，Ad)载体及副黏病毒(paramyxovirus)载体疫苗等，近年来，腺病毒载体疫苗和副黏病毒载体疫苗受到广泛关注。

二、肺炎球菌及其流行病学