[发明专利]基因组DNA提取方法及提取试剂盒

权利要求书

1.一种基因组DNA提取方法，其特征在于：待提取样品通过依次裂解细胞及去除蛋白，再经吸附提纯及干燥溶解以获得待提取样品中的基因组DNA溶液；其中，去除蛋白通过将蛋白沉淀实现；所述待提取样品选自动物血液或动物组织细胞。

2.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于，所述血液样品中的DNA提取方法包括如下步骤：

a)去除红细胞：向待提取样本中加入红细胞裂解液，裂解待提取样本中的红细胞，离心分离，至红细胞完全裂解，取白色沉淀；

b)裂解白细胞及消化蛋白：向步骤a所得的白色沉淀中加入细胞裂解液及蛋白酶K，裂解本步骤反应体系中白细胞并消化本步骤反应体系中的蛋白，温育反应体系；

c)去除蛋白：向步骤b所得的体系中加入蛋白沉淀剂，沉淀反应体系中的蛋白质，促进DNA的析出，静置后离心，保留上清液；

d)DNA吸附提纯：向步骤c所得的上清液中加入DNA沉淀剂，混匀后分次加入阳离子DNA层析柱中，离心弃废液，洗涤层析柱后离心；

e)DNA溶液收集：将步骤d经洗涤离心所得的层析柱离心，离心后将层析柱移入新的离心管，风干离心管，加入洗脱液静置，再次离心后收集DNA溶液。

3.根据权利要求1所述的基因组DNA提取方法，其特征在于，所述组织样品中的DNA提取方法包括如下步骤：

a)裂解细胞及消化蛋白：向收集好的组织细胞保存液中加入细胞裂解液及蛋白酶K，裂解本步骤反应体系中细胞并消化本步骤反应体系中的蛋白，温育反应体系；

b)去除蛋白：向步骤a所得的体系中加入蛋白沉淀剂，沉淀反应体系中的蛋白质，促进DNA的析出，静置后离心，保留上清液；

c)DNA吸附提纯：向步骤b所得的上清液中加入DNA沉淀剂，混匀后分次加入阳离子DNA层析柱中，离心弃废液，洗涤层析柱后离心；

d)DNA溶液收集：将步骤c经洗涤离心所得的层析柱离心，离心后将层析柱移入新的离心管，风干离心管，加入洗脱液静置，再次离心后收集DNA溶液。

4.根据权利要求2所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：蛋白沉淀剂为醋酸铵溶液，且浓度不低于4mol/L。

5.根据权利要求2所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：蛋白沉淀剂浓度为10mol/L。

6.根据权利要求2所述的基因组DNA提取方法，其特征在于，所述步骤d的具体操作为：向步骤c所得上清液中加入DNA沉淀剂，混匀后分次加入阳离子DNA层析柱中，离心弃废液，70％乙醇700μl洗涤层析柱，12000rpm离心1min，重复洗涤层析柱至少2次；其中：DNA沉淀剂为异丙醇或无水乙醇。

7.根据权利要求2所述的基因组DNA提取方法，其特征在于，所述提取方法中步骤e的具体操作为：将步骤d中经洗涤离心的层析柱再次离心，将离心后层析柱移入新的离心管，离心管开盖风干5min，加入洗脱液静置，12000rpm离心2min后收集DNA溶液，-20℃保存备用。

8.根据权利要求7所述的基因组DNA提取方法，其特征在于：洗脱液为TE缓冲液，TE缓冲液中含10mM Tris-HCl及1mM EDTA，溶液pH为8.0。

9.一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：成分为红细胞裂解液的A液，成分为细胞裂解液的B液，成分为蛋白酶K的C液，成分为蛋白沉淀剂的D液，成分为洗脱液的E液，以及DNA阳离子层析柱为F成分。

10.根据权利要求9所述的基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，A液为5mol/L NaCl 0.2mL、1M Tris-Hcl 2mL和0.5M EDTA 0.02mL的混合溶液；B液每100mL含1g SDS、1M Tris-HCl 1mL、NaCl 0.585g和0.5M EDTA 1mL；C液为20mg/mL蛋白消化酶；D液为浓度不低于4mol/L的醋酸铵溶液；E液为TE缓冲液。