[发明专利]基因组DNA提取方法及提取试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因组DNA提取方法及提取试剂盒，属于生物医疗领域。

背景技术

核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此，核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。基因检测是现代分子生物学研究和精准医疗的主要手段。从人体或动物的血液或组织中提取高质量的DNA是基因检测、精准医疗及其他分子生物学研究及临床相关检测的前提，后继的实验如PCR、QPCR等都需要在核酸提取的基础上才能更好的开展。

目前，常用的DNA提取方法包括苯酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法等，这些方法各有优缺点。苯酚氯仿抽提法需要频繁使用有毒试剂，容易带来安全问题，且提取过程繁琐、提取效率低。柱离心法采用硅基质材料在一定的高盐缓冲体系下高效、专一地吸附DNA，所也需要使用到如苯酚、氯仿等有毒试剂，并且离心柱法提取过程耗时较多，影响了整体分析检测的速度。磁珠法为依靠纳米新材料吸附DNA的新型提取方法，具有试剂安全用量少、DNA分子结构完整等优点，但提取的DNA质量与磁珠的质量密切相关，磁珠本身的造价较高，使得磁珠提取法的提取成本高于传统提取方法。

由于DNA提取的基础性和常规性，使得生物领域的科研人员在DNA提取领域的研究从未停止过。例如，中国专利申请CN 106868000A公开了一种体液悬浮细胞DNA提取试剂盒，包括重悬液、蛋白酶K溶液、RNA酶A溶液、裂解液、沉淀剂、洗涤液A、洗涤液B和DNA溶解液，使用该剂盒提取体液悬浮细胞DNA的方法，包括以下步骤：离心、沉淀重悬、添加裂解液、蛋白酶K溶液裂解，添加沉淀剂离心，添加洗涤液A，与洗涤液B离心洗涤，室温干燥后添加DNA溶解液。该方法仅适合体液悬浮细胞DNA的收集和提取工作，适用范围较窄，并且该方法中洗涤液A和B需提前在-20度预冷处理30分钟，操作较繁琐。中国专利申请CN 106906207A公开了一种核酸快速提取试剂盒，试剂盒内包括单独配制的混合酶工作液、裂解吸附液、洗涤液、漂洗液和洗脱液，混合酶工作液包括蛋白酶K和溶菌酶，裂解吸附液包括Gu-Hcl、Tris-Hcl、EDTA、异丙醇、SDS、Triton-100、β-巯基乙醇和柠檬酸钠，洗涤液包括Licl、Nacl、MOPS和乙醇，漂洗液为乙醇，洗脱液为EDTA和Tris-Hcl。该方法不仅需要使用有毒有害试剂，并且实验过程中需要用到磁性纳米微球和磁分离架，增加了使用成本。中国专利申请CN 106867992A公开了一种全血DNA提取试剂盒，采用纳米磁珠吸附包裹DNA，以达到分离提纯的目的，该试剂盒由裂解液、纳米磁珠、洗涤液和洗脱液组成，其中裂解液包括异硫氰酸胍、碘化锂、柠檬酸三钠、Tween 20，所述纳米磁珠包括包裹有二氧化硅的Fe₃O₄，洗涤液包括异硫氰酸胍、Tris-HCl、NaCl和无水乙醇，洗脱液包括Tris-HCl和EDTA二钠。该试剂盒需包括至少十种成分，不仅试剂有毒，且所需设备较多，步骤复杂，提取的周期也较长。

现有的技术中，对样本中的杂质去除方式一般是酶消化、强酸强碱沉淀及离心分离等，去除样本中如RNA、蛋白质一类的杂质，但这些提纯方式存在着除杂不彻底或者过度除杂影响DNA结构的问题。尤其是人血及组织细胞中的蛋白质，除杂过程对提纯后的DNA纯度及提取浓度上均有影响。中国专利申请CN104560959A公开了一种饱和氯化钠法快速批量提取血液DNA的试剂盒及方法，该试剂盒包括红细胞裂解液、去蛋白液、蛋白沉淀剂、调节结合液、洗脱液和蛋白酶K溶液，其中所述去蛋白液位70％乙醇，去蛋白沉淀液为饱和氯化钠溶液。该方法可以实现对血液中DNA的提取，但由于体液成分较为复杂，部分体液中悬浮细胞量极少，因此该方法对于体液中DNA的提取难以满足对纯度、产量和完整性的要求，其中沉淀蛋白需要低温，后又需要加热溶解进行后续反应，反应条件繁琐，使用难度大。在该方法中，氯化钠溶液作为蛋白沉淀液可以沉淀样本中蛋白，但氯化钠溶液易溶于水，微溶于乙醇，导致在后面除杂的过程中不容易将盐离子去除干净，对DNA的品质有影响，也为后续的实验操作带来了隐患。

综上，迫切需要有一种操作简单、对提取仪器及人员要求低、无毒无害，并且可以有效的去除杂质、不影响DNA结构的核酸提取方法及提取试剂盒。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种操作简便、安全性好的基因组DNA提取方法及提取试剂盒。