[发明专利]抗稻瘟病Pi2基因特异性分子标记的开发与应用

权利要求书

1.一种Pi2基因的检测引物，其特征在于所述引物的正向引物是5'- GCAGCCATTGAGAAGCTCTC -3'，反向引物是5'- CCCCAAGTATCAGCATGGTT -3'。

2.一种水稻抗稻瘟病基因Pi2的HRM检测方法，其特征在于所述HRM检测体系包含一对检测引物，所述检测引物的正向引物是5'-GCAGCCATTGAGAAGCTCTC-3'，反向引物是5'-CCCCAAGTATCAGCATGGTT-3'。

3.根据权利要求2所述的HRM检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

a）提取待测样本DNA；

b）配制包含待测样品DNA、检测引物、PCR试剂盒和EvaGreen荧光染料的PCR反应体系进行PCR扩增；和

c）对PCR产物进行HRM分析扫描。

4. 根据权利要求3所述的HRM检测方法，其中所述的提取待测样品DNA的方法是：取样，直接加提取液研磨，沸水浴10min后，静置分层取上清即为待测样品DNA，其中所述的提取液包含10mM Tris-HCl、0.5mM EDTA和0.15M KCl。

5. 根据权利要求3所述的HRM检测方法，其中所述的PCR反应体系包含1μL PCR模板，0.5U rTaq DNA聚合酶，1×PCR 缓冲液，250μM dNTP，0.1μM正向和反向引物和0.1μL 20×EvaGreen 荧光染料。

6.根据权利要求3所述的HRM检测方法，其中所述的PCR扩增条件是：94℃3分钟；94℃30秒、58℃30秒、72℃10秒，40个循环；72℃1分钟；紧接着95℃变性1分钟；25℃复性1分钟。

7.一种基于HRM技术的水稻抗稻瘟病基因Pi2的检测试剂盒，其特征在于所述检测试剂盒中包含一对检测引物，所述检测引物的正向引物是5'-GCAGCCATTGAGAAGCTCTC-3'，反向引物是5'-CCCCAAGTATCAGCATGGTT-3'。

8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其中所述的试剂盒还包含PCR试剂和荧光染料。

9.权利要求7-8之任一所述的检测试剂盒的使用方法，其特征在于所述使用方法包括如下步骤：

a）提取待测样本DNA；

b）配制包含待测样本DNA、引物对、PCR试剂盒和EvaGreen荧光染料的PCR反应体系进行PCR扩增；和

c）对PCR产物进行HRM分析扫描。

10.权利要求1之所述的引物、权利要求2-6之任一所述的HRM检测方法、权利要求7-9之任一所述的试剂盒在检测水稻抗稻瘟病基因Pi2中的应用。