[发明专利]一种抑制肿瘤细胞扩散转移的多肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽及其制备方法和应用，特别涉及一种具有抑制肿瘤细胞扩散转移的多肽及其制备方法和应用，属于生物制药领域。

背景技术

浸润转移是恶性肿瘤主要病理学特征之一，也是恶性肿瘤难于治愈，最终导致病人死亡的主要原因。根据临床资料和流行病学调查分析，恶性肿瘤在临床确诊时，有40％的患者瘤细胞已发生全身扩散。采用手术、放疗技术对原发肿瘤治疗的同时，也会导致肿瘤细胞在体内广泛的扩散转移。因此，在治疗原发肿瘤同时，常辅以化疗以杀灭这些扩散的肿瘤细胞。然而，目前常用的化疗药物均有较强的细胞毒性，也是导致病人死亡的原因之一。因此，弄清楚恶性肿瘤细胞扩散转移的分子机制，寻找抑制肿瘤细胞扩散转移的药物靶点，设计新型高效的、低毒的抗肿瘤转移药物，以提高恶性肿瘤病人临床治愈率及提高生存率，是目前恶性肿瘤治疗的重要策略之一。

目前已发现多种有抗肿瘤作用多肽，有的已进入临床前实验阶段，但抑制肿瘤转移的多肽报道很少。有研究发现，MANS肽(肉豆蔻基富含丙氨酸n末端序列)能有效阻止肿瘤细胞的运动。MANS肽能抑制小鼠肺癌细胞移动或转移。研究分析，当MANS肽被一种蛋白激酶(蛋白质--肉豆蔻基富含丙氨酸C激酶)被激活时，它结合细胞骨架，也结合肌动蛋白以及细胞膜。使肌动蛋白的运动转化成细胞的运动。伊利诺伊大学的研究者发现大豆肽lunasin可以明显降低其结肠癌的转移，给小鼠口服20mg的大豆肽lunasin可以降低94％的转移性肿瘤；lunasin同化疗药物奥沙利铂一起联合使用可产生更为明显的结果，可以使得肝脏中的转移性肿瘤降低6倍。研究者深入研究揭示，lunasin可以渗入到癌细胞中引发其死亡，而且可以和至少一种转移性癌细胞上的受体进行结合。

多肽类药物具有分子量小、低毒性、高活性、无免疫原性、易于穿透肿瘤细胞等特点，且能以多种方式给药、易于多途径吸收。多肽药物对人类的健康正做出越来越大的贡献。有科学家提出21世纪将是多肽的世纪，多肽产业将是21世纪的“朝阳产业”。

发明内容

本发明的目的是基于抗肿瘤多肽分子设计理论和固相化学合成技术，提供一种具有高效、低毒的抗肿瘤转移活性多肽。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供一种抑制肿瘤细胞扩散转移的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。分子量为2777.26Da。

本发明还提供本发明所述的多肽在制备抑制肿瘤细胞扩散转移制剂中的应用。所述制剂可以为本发明所述的多肽，也可以为含有本发明多肽和其他药学上可允许的辅料的制剂。

本发明还提供所述的抗肿瘤多肽的制备方法，该多肽用固相化学合成法制备得到，包括以下步骤：

(1)将Fmoc保护氨基酸在2-CL树脂上按预先设计的顺序从C端到N端逐个进行偶合并去除Fmoc保护基，得连接有树脂的多肽链；

(2)步骤(1)得到的多肽链中加入裂解液，在25～35℃温度下，反应2-4小时，抽滤，滤液经纯化得到多肽粗品。

进一步地，在上述技术方案中，在步骤(1)中所述的将Fmoc保护氨基酸在2-CL-树脂上偶合并去除Fmoc保护基的方法为：称取2-CL树脂放入反应器中，加入DCM，加入Fmoc保护氨基酸和DIEA，用氮气鼓泡反应3h，然后加入甲醇和DIEA，反应半小时，抽掉反应液，用DMF或DCM洗净，加入适量哌啶去除Fmoc保护基，得连接有树脂的多肽链。

进一步地，在上述技术方案中，步骤(2)中所述的滤液的纯化包括如下步骤：滤液中加入冰乙醚使多肽沉降出来，离心得到多肽粗品。

进一步地，在上述技术方案中，所述的裂解液为87.5％的TFA水溶液。

对于上述制备方法获得的本发明的多肽粗品用高效液相色谱进一步提纯，用质谱仪检测该序列分子量的正确性。

采用transwell和划痕法，检测本发明多肽对人结肠癌sw620细胞、人前列腺癌PC3细胞、人乳腺癌MDA-MB-231细胞、鼠肺癌LLC细胞的体外迁移运动。结果显示，本发明多肽可以抑制肿瘤细胞体外迁移运动。提示本发明多肽可以抑制肿瘤细胞浸润及穿透血管壁。

采用尾静脉注射小鼠肺癌LLC细胞，建立小鼠肺转移模型，检测本发明多肽对肺癌转移形成的影响。结果显示，本发明多肽在体内可完全阻断肺癌转移的形成。

本发明的有益效果：