[发明专利]一种荧光免疫层析卡的制备方法及荧光免疫层析卡

说明书

本发明提出了一种荧光免疫层析卡的制备方法及荧光免疫层析卡，该方法包括ZnS量子点标记抗体的制备，并将制备的ZnS量子点标记抗体冷藏；通过S1步骤制备的ZnS量子点标记抗体进行ZnS量子点标记抗体检测液的制备，并将制备的ZnS量子点标记抗体检测液冷藏；制备包被有检测抗体的反应膜；通过S3步骤制备的反应膜制备试纸板，并就将制备完成的试纸板与试纸卡组合；该卡包括PVC板；反应膜设置在PVC板上；吸水垫设置在反应膜上；检测区和控制区均设置在吸水垫上，并相邻设置；本发明提出的荧光免疫层析卡的制备方法及荧光免疫层析卡具有便捷快速、灵敏特异等特点，使得血管内皮生长因子成本降低的同时更加便捷。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，特别是指一种荧光免疫层析卡的制备方法及荧光免疫层析卡。

背景技术

血管内皮生长因子(VEGF)是促进肿瘤血管新生的关键性蛋白。对人体血清中VEGF含量的测定，在血管新生类疾病如肿瘤的疗效评估监测、肿瘤复发监测、肿瘤病人预后、肿瘤辅助诊断和肿瘤广谱筛查中具有重要意义。

1971年Folkman指出在没有血管生成的情况下，实体肿瘤单纯依靠弥散获取氧气及营养物质，生长范围只能维持在1－2mm³，肿瘤组织生长范围超过2 －3mm³时，必须依靠血管生成来提供足够的氧气和营养物质维持肿瘤组织的快速生长；

后来，这Folkman的说法得到证实，并由Folkman本人作了总结，提出了 Folkman理论。Folkman理论揭示了肿瘤的生长和转移依赖于血管生成的原理。一方面，肿瘤在原位生长时必须依赖血管生成；另一方面，肿瘤的转移同样需要血管生成来提供足够的氧气和营养成分；

依照Folkman理论，血管生成是恶性肿瘤生长和转移的基础，而VEGF则是肿瘤血管生成最重要的生长因子之一。Folkman理论指明了癌症病人血管生成的两个主要研究方向：①抑制血管生成阻抑癌症生长。②检测VEGF作为癌症高危人群的筛查、辅助诊断、预后，以及治疗疗效的评估和监测等。另外，也有利用鼠抗血管内皮生长因子多克隆抗体、抗血管内皮生长因子单克隆抗体建立的ELISA检测方法应用于血管内皮生长因子的免疫学检测。

虽然ELISA检测也能在几小时内诊断出血管内皮生长因子，具有较高的特异性和灵敏度，但存在操作技术要求高、设备比较昂贵等缺点，不便于基层生产应用。开发研究便捷快速、灵敏特异的检测技术已成为一种迫切的需要。

发明内容

本发明提出一种荧光免疫层析卡的制备方法及荧光免疫层析卡，通过该方法制备的荧光免疫层析卡具有便捷快速、灵敏特异等特点，使得血管内皮生长因子成本降低的同时更加便捷。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种荧光免疫层析卡的制备方法，包括：

S1、ZnS量子点标记抗体的制备，并将制备的ZnS量子点标记抗体冷藏；

S2、通过S1步骤制备的ZnS量子点标记抗体进行ZnS量子点标记抗体检测液的制备，并将制备的ZnS量子点标记抗体检测液冷藏；

S3、制备包被有检测抗体的反应膜；

S4、通过S3步骤制备的反应膜制备试纸板，并就将制备完成的试纸板与试纸卡组合。

作为进一步的技术方案，S1步骤包括：

S11、取浓度为5μM的1nmol羧基水溶性ZnS量子点，用超声波分散处理；

S12、将ZnS量子点、碳二亚胺盐酸盐和抗体均用100mM、pH6.0-7.4的绷酸盐溶液溶解；

S13、按照2.5μmol碳二亚胺盐酸盐/2nmolZnS量子点的比例加入碳二亚胺盐酸盐，振荡混匀；