[发明专利]一种荧光免疫层析卡的制备方法及荧光免疫层析卡

权利要求书

1.一种荧光免疫层析卡的制备方法，其特征在于，包括：

S1、ZnS量子点标记抗体的制备，并将制备的ZnS量子点标记抗体冷藏；

S2、通过S1步骤制备的ZnS量子点标记抗体进行ZnS量子点标记抗体检测液的制备，并将制备的ZnS量子点标记抗体检测液冷藏；

S3、制备包被有检测抗体的反应膜；

S4、通过S3步骤制备的反应膜制备试纸板，并就将制备完成的试纸板与试纸卡组合。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1步骤包括：

S11、取浓度为5μM的1nmol羧基水溶性ZnS量子点，用超声波分散处理；

S12、将ZnS量子点、碳二亚胺盐酸盐和抗体均用100mM、pH6.0-7.4的绷酸盐溶液溶解；

S13、按照2.5μmol碳二亚胺盐酸盐/2nmolZnS量子点的比例加入碳二亚胺盐酸盐，振荡混匀；

S14、再按50nmol抗体/lnmolZnS量子点的比例加入浓度为5mg/mL的抗体混匀，室温搅拌反应1小时；

S15、当S14步骤反应结束后，用截留分子量为40kDa-80kDa的离心超滤管超滤浓缩至约60μl，然后采用凝胶色谱法进行纯化，收集有荧光的部分，再用离心超滤管浓缩至ZnS量子点浓度为1.1μmol/L，保存于55mM、pH为7.4-9.0的、含有质量百分比浓度为0.05％的NaN₃的绷酸盐缓冲液中，冷藏备用。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述S11步骤为：取浓度为5μM的1nmol羧基水溶性ZnS量子点平衡至室温，用超声波分散处理。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述S15步骤为：当S14步骤反应结束后，用截留分子量为40kDa-80kDa的离心超滤管超滤浓缩至约60μl，然后采用凝胶色谱法进行纯化，收集有荧光的部分，再用离心超滤管浓缩至ZnS量子点浓度为1.1μmol/L，保存于55mM、pH为7.4-9.0的、含有质量百分比浓度为0.05％的NaN₃的绷酸盐缓冲液中，2-8℃冷藏备用。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S2步骤包括：

将ZnS量子点标记抗体液取出放置至室温，用PBS-T稀释550倍成ZnS量子点标记蛋白检测液，PBS—T为含80mM氯化钠、0.1％吐温、6mg/mL牛血清白蛋白、0.02％叠氮化钠的55mM磷酸盐缓冲液，2-8℃冷藏备用。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S3步骤包括：

以硝酸纤维素膜为反应膜，将反应膜固定粘贴在PVC背衬的中部，将抗体用包被缓冲液调节浓度至0.1-5mg/ml，并将二抗IgG用包被缓冲液调节浓度至0.1-5mg/mL，按照0.8-1.2uL/cm的膜液量，将ZnS量子点标记抗体检测液以及二抗lgG喷到反应膜上对应的检测区和控制区上进行包被，进行烘箱处理后置于保藏箱备用。

7.如权利要求6述的方法，其特征在于，所述S3步骤包括：

以硝酸纤维素膜为反应膜，将反应膜固定粘贴在PVC背衬的中部，将抗体用包被缓冲液调节浓度至0.1-5mg/ml，并将二抗IgG用包被缓冲液调节浓度至0.1-5mg/mL，按照0.8-1.2uL/cm的膜液量，将ZnS量子点标记抗体检测液以及二抗lgG喷到反应膜上对应的检测区和控制区上进行包被，检测区和控制区之间间隔为5mm，放置25-37℃烘箱处理2小时，置于恒温恒湿保藏箱里备用。

8.如权利要求6述的方法，其特征在于，包被缓冲液包括：

70mM氯化钠NaCl、0.05％—3％聚乙二醇PEG20000、0.2％—1％泡藻糖、2mg/mL-lOm/mL牛血清白蛋白BSA、0.02％叠氮化钠的55mM磷酸盐缓冲液。