[发明专利]一种人血清中抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体-MMAE偶联物中和抗体检测方法

说明书

一种检测人血清中抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体‑MMAE偶联物中和抗体的方法，包括如下步骤：应用SK‑BR‑3细胞系作为靶细胞，研究药物生物活性；使用药物作为抗原免疫食蟹猴，使用药物F(ab)’2片段加强免疫，制备阳性多抗；应用SPE萃取技术对血清样本进行前处理，消除血清干扰，提高方法稳定性和药物耐受能力；基于药物活性方法开发中和抗体检测方法，应用于经处理后的血清样本中中和抗体的检测。本发明的方法源自基于细胞水平的生物活性方法，直接反映药物分子作用机理MoA；应用对药物作用更为敏感的SK‑BR‑3细胞，有利于方法灵敏度的提高；阳性对照抗体通过免疫非人灵长类制备，与真实样本的可比性更强；血清样本经前处理后再进行检测，检测结果更为稳定可靠。

技术领域

本发明涉及一种抗体药物偶联物中和抗体检测方法，具体是一种基于细胞水平分析方法检测人血清中抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体-MMAE偶联物中和抗体的方法。

背景技术

抗体药物偶联物（ADC, Antibody-drug conjugate）是一种新型的治疗性蛋白药物，由三个部分组成，针对特定靶点的抗体，通过化学修饰的连接子（linker）与具有细胞毒性的小分子药物共价结合而形成。ADC通过其抗体分子结构区域与肿瘤细胞表面过表达的抗原靶点结合，达到特定部位，而经过特殊设计的连接体保证了其在到达特定位点之前的稳定性，从而特异性地释放小分子毒物。与抗原结合后，ADC刺激靶细胞发生内化作用而进入细胞。在胞内溶酶体作用下发生降解并释放小分子毒性药物。小分子药物在胞内与其特定靶点（如微管蛋白等）结合，通过抑制增殖、促进凋亡等发挥毒性作用杀死细胞。同时有些抗体存在抗肿瘤活性，如Kadcyla中曲妥珠单抗（trastuzumab）可与小分子药物DM1发挥协同作用。ADC通常用于肿瘤领域疾病的治疗，与传统的小分子化药相比，因具有靶向性强、毒副作用弱、半衰期长等优势，从而具有广阔的应用前景。

作为一种蛋白药物复合物，ADC由于其分子结构的复杂性，给药物的免疫原性风险评估带来挑战。蛋白药物的免疫反应一般通过体液免疫途径介导，因此检测药物诱导产生的抗药抗体（Anti-drug antibody, ADA）成为免疫原性分析的重要指标。对于ADC药物而言，其免疫原性可能来自裸抗分子、linker、小分子药物以及偶联过程中产生的新位点（neo-epitope），而对确认为阳性的抗药抗体进行进一步的表位鉴定及中和抗体分析，可以帮助我们更好的理解并评价其免疫性质。蛋白药物的中和抗体（Neutralizing antibody，NAb）是指一类可以中和药物生物学活性的抗药抗体，直接影响药物的临床疗效。同时对于具有一定内源性的药物而言，中和抗体的产生也会带来严重的安全问题，因此中和抗体的分析也已成为法规的必然要求。据报道，Kadcyla大约有5% ADA阳性率，目前未出现中和抗体的报道。而分子结构中包含人鼠嵌和抗体的Adcetris，其ADA阳性率高达37%，且约有60%的ADA具有中和活性。