[发明专利]一种人血清中抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体-MMAE偶联物中和抗体检测方法

权利要求书

1.一种检测人血清中抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体-MMAE偶联物中和抗体的方法，包括如下步骤：

步骤一，应用SK-BR-3人乳腺癌细胞系作为靶细胞，研究药物增殖抑制活性，选择EC₅₀左右浓度作为固定的药物浓度；

步骤二，使用药物作为抗原免疫食蟹猴，使用药物分子F(ab)’2片段加强免疫，经药物亲和纯化制备多抗,用作阳性对照；

步骤三，应用固相萃取技术从人血清中提取ADA，消除基质干扰，提高药物耐受能力。

步骤四，人血清样本经步骤三处理后，检测抗药抗体中和活性。

2.根据权利要求1所述的应用SK-BR-3作为靶细胞研究药物生物活性，其特征是，来源于人类乳腺癌细胞，细胞表面高表达HER2蛋白。其对药物作用非常敏感，细胞增殖抑制EC₅₀在10 ng/mL左右。

3.根据权利要求1所述的使用药物作为抗原免疫食蟹猴，制备阳性多抗，其特征是，免疫非人灵长类制备的多抗，与真实样本产生的抗药抗体具有较强可比性。初次免疫后，使用药物分子F(ab)’2加强免疫，提高抗体中抗idiotype抗体的比例，从而提高阳性对照抗体的中和活性，同样有利于提高方法的灵敏度。

4.根据权利要求1所述的人血清前处理方法，应用步骤三固相萃取技术定向萃取其中的ADA，可消除血清干扰，提高方法的稳定性；同时可提高方法的药物耐受能力，提高血药存在情况下检测结果的可信度。

5.根据权利要求1所述的中和抗体检测方法，其特征是，该方法通过基于细胞水平的活性方法转换而来，直接反映药物作用机理（MoA），并且呈剂量-效应关系，分析结果在临床上具有实际参考意义。