[发明专利]一种鉴定穿山甲种属的液质联用检测方法

权利要求书

1.一种鉴定穿山甲种属的液质联用检测方法，其包括以下步骤：

1)制备供试品溶液；

2)用色谱和质谱联用的方法对样品进行分析；

3)采用特征离子定性鉴别的方法对样品进行鉴定；

所述制备供试品溶液的方法是：取穿山甲样品，捣碎打粉，过六号筛，称取粉末10mg，置10ml量瓶中，加8M尿素1ml，再加1M的二硫苏糖醇10μl，水浴60℃加热30min，放冷，加入1M的碘乙酰胺30μl，黑暗静置30min，加1％NH₄HCO₃溶液稀释至10ml，加1μg/μl的胰蛋白酶溶液20μl，摇匀，37℃恒温酶解15h以上，即得；

所述色谱条件为：以Agilent Zorbax 300SB-C18为色谱柱，流速0.15ml/min，柱温40℃，进样量3μl；以0.1％甲酸-水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0～10min，5％～10％B；10～45min，10％～25％B；45～70min，25％～40％B；70～75min，40％～95％B；75～82min，95％B；82～85min，95％～5％B；85～95min，5％B；

所述穿山甲种属的物种为中华穿山甲，树穿山甲，印度穿山甲；

所述检测方法的鉴定依据是：

色谱和一级质谱联用检测时，中华穿山甲的特征离子m/z615.2910，所带电荷数2，保留时间为24.870min；

树穿山甲有三个特征离子，分别为特征离子m/z451.4920，所带电荷数4，保留时间为37.740min；特征离子m/z483.7659所带电荷数4，保留时间为31.329min；特征离子m/z732.0417，所带电荷数3，保留时间为51.177min；

印度穿山甲的特征离子m/z435.1988，所带电荷数2，保留时间为13.756min；

色谱和二级质谱联用检测时，中华穿山甲还含有特征碎片离子m/z775.3、m/z832.3；

树穿山甲特征离子为m/z451.4920的，还含有特征碎片离子m/z540.6、m/z564.0；特征离子为m/z483.7659的还含有特征碎片离子m/z583.3、m/z606.6；特征离子为m/z732.0417的还含有特征碎片离子m/z921.5、m/z1172.6；

印度穿山甲还含有特征碎片离子m/z482.2、m/z539.3。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质谱条件为：以液相色谱-飞行时间质谱LC-QTOF为分析检测仪器，离子化模式为Dual ESI-Positive正离子模式；毛细管电压3000V，锥孔电压65V，毛细管出口电压175V，除溶剂温度300℃，除溶剂气体8L/min；采用profile采集方式，扫描范围100～3000m/z，扫描时间1spectra/s。