[发明专利]一种铁皮石斛利用茎段薄片进行扩繁的方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，

1)培养基制备

接种培养基为：MS+6-BA 0.125-0.25mg/L+NAA 0.125-0.375mg/L+2，4-D 0.5-1.5mg/L+KT 0.125-0.25mg/L；

增殖培养基为：蒸馏水+花宝1号1.4-1.6g/L+花宝2号0.30-0.35g/L+牛骨蛋白胨1.5-1.6g/L+活性炭1.5-1.6g/L+MS母液中的6、7部分各10-12ml/L+蔗糖18-20g/L+琼脂粉5.5-6.0g/L+香蕉泥100-120g/L；

所述MS母液中的6部分为：硼酸0.62g/L，硫酸锰1.86g/L，硫酸锌0.86g/L，碘化钾0.083g/L，钼酸钠0.025g/L，硫酸铜0.0125g/L，氯化钴0.0125g/L；

所述MS母液中的7部分为：肌醇10g/L，甘氨酸0.2g/L，烟酸0.05g/L，盐酸吡哆辛0.03g/L，盐酸硫胺素0.02g/L；

2)外植体预处理与接种培养

采用健康铁皮石斛的茎段作为外植体，将外植体洗涤、灭菌后将茎段横切为厚度0.2cm以上的茎段薄片，然后接种于接种培养基上光培养25±2天，外植体上生芽，继续光培养至无菌苗长出3-5片叶时进行增殖；

3)无菌苗接种

当无菌苗长出3-5片叶时，将无菌苗移植到装有增殖培养基的组织培养瓶中，光培养15-25天，每棵无菌苗分生出20-30棵小苗；

4)壮苗培养、生根培养和出瓶炼苗

将增殖的铁皮石斛苗经壮苗培养和生根培养后；选取根系发达及健壮的铁皮石斛放在温室驯化2-3天；清洗干净根部的培养基，移栽至已浇透水的树皮基质中继续培养至植株长大。

2.如权利要求1所述的一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，所述步骤2)的灭菌为：用75％酒精灭菌30s，后用无菌水冲洗1次；用0.1％升汞溶液灭菌8min，用无菌水冲洗3次。

3.如权利要求1所述的一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，所述步骤4)的壮苗培养为：将增殖的铁皮石斛苗转接到壮苗培养基上继续培养，光照强度为1500-1800lux，培养8-15d；所述壮苗培养基为：MS+IBA0.3mg/L+NAA0.4mg/L+2，4-D0.7mg/L+活性炭5g/L+琼脂30g/L+香蕉泥20g/L，pH值为5.0-5.5。

4.如权利要求1所述的一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，所述步骤4)的生根培养为：于生根培养基上光照强度为2500-4500lx下培养3-8天；生根培养基为：MS+IBA3mg/L+NAA 1mg/L+2，4-D 0.2mg/L+活性炭10g/L+琼脂30g/L+香蕉泥20g/L。

5.如权利要求1所述的一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，所述步骤3)的组织培养瓶一瓶接种3-4棵石斛无菌苗。

6.如权利要求1-5中任意一项所述的一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，所述步骤1)的接种培养基为：MS+6-BA 0.125mg/L+NAA 0.125mg/L+2，4-D 0.5mg/L+KT0.125mg/L。

7.如权利要求1-5中任意一项所述的一种铁皮石斛利用茎段薄片扩繁的方法，其特征是，所述步骤1)的增殖培养基为：蒸馏水+花宝1号1.4g/L+花宝2号0.30g/L+牛骨蛋白胨1.5g/L+活性炭1.5g/L+MS母液中的6、7部分各取10ml/L+蔗糖18g/L+琼脂粉5.5g/L+香蕉泥100g/L。