[发明专利]一种循环肿瘤DNA检测方法,探针及传感器有效
申请号: | 201710585484.4 | 申请日: | 2017-07-18 |
公开(公告)号: | CN107513530B | 公开(公告)日: | 2020-10-27 |
发明(设计)人: | 张玮莹;蔡春艳;曹一平 | 申请(专利权)人: | 江汉大学 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;G01N27/48;G01N27/327 |
代理公司: | 北京华沛德权律师事务所 11302 | 代理人: | 房德权 |
地址: | 430056 湖北省武*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 循环 肿瘤 dna 检测 方法 探针 传感器 | ||
1.一种循环肿瘤DNA检测传感器,其特征在于,包括:丝网印刷电极以及设置在其上的金纳米粒子-适配体复合物与包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物;
测量时,将所述金纳米粒子-适配体复合物与样本混合在丝网印刷电极上,待反应结束完成初步捕获后,再滴加包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物实现进一步特异性捕获循环肿瘤DNA,排除干扰;
所述金纳米粒子-适配体复合物的制备方法包括:
按照2∶1的体积比,依次将金纳米粒子AuNPs和适配体 Aptamer混合均匀,室温避光静置24小时;
加入等量的磷酸缓冲盐溶液PBS,室温避光静置6小时;
加入氯化钠NaCl溶液,使溶液中NaCl的浓度调节至0.05M,随后室温静中将NaCl的浓度调节至0.1M;
在12,000 rpm条件下离心30min,弃去上层清液,用0.1M的 NaCl和PBS缓冲液润洗下层固体,储存在0.02% v/v吐温20(Tween 20)水溶液中;
包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物的制备方法包括:
将包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白加入至含有可溶于水的碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS的2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲溶液中并超声30分钟;
所得混合溶液以不低于10000 rpm离心5分钟,弃去上层清液;
向离心后得到的沉淀中加入1 mg/mL5-甲基胞嘧啶单克隆抗体,室温下孵化3小时;
混合液在10,000 rpm条件下离心10min,弃去上层清液,用PBS润洗下层固体,用PBS缓冲溶液储存4℃冰箱中备用。
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