[发明专利]一种循环肿瘤DNA检测方法，探针及传感器

权利要求书

1.一种循环肿瘤DNA检测传感器，其特征在于，包括：丝网印刷电极以及设置在其上的金纳米粒子-适配体复合物与包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物；

测量时，将所述金纳米粒子-适配体复合物与样本混合在丝网印刷电极上，待反应结束完成初步捕获后，再滴加包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物实现进一步特异性捕获循环肿瘤DNA，排除干扰；

所述金纳米粒子-适配体复合物的制备方法包括：

按照2∶1的体积比，依次将金纳米粒子AuNPs和适配体 Aptamer混合均匀，室温避光静置24小时；

加入等量的磷酸缓冲盐溶液PBS，室温避光静置6小时；

加入氯化钠NaCl溶液，使溶液中NaCl的浓度调节至0.05M，随后室温静中将NaCl的浓度调节至0.1M；

在12,000 rpm条件下离心30min，弃去上层清液，用0.1M的 NaCl和PBS缓冲液润洗下层固体，储存在0.02% v/v吐温20（Tween 20）水溶液中；

包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物的制备方法包括：

将包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白加入至含有可溶于水的碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS的2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲溶液中并超声30分钟；

所得混合溶液以不低于10000 rpm离心5分钟，弃去上层清液；

向离心后得到的沉淀中加入1 mg/mL5-甲基胞嘧啶单克隆抗体，室温下孵化3小时；

混合液在10,000 rpm条件下离心10min，弃去上层清液，用PBS润洗下层固体，用PBS缓冲溶液储存4℃冰箱中备用。