[发明专利]微载体上的多能干细胞培养在审
| 申请号： | 201710585295.7 | 申请日： | 2009-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN107267442A | 公开（公告）日： | 2017-10-20 |
| 发明（设计）人： | S.纳尔逊 | 申请（专利权）人： | 詹森生物科技公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司72001 | 代理人： | 彭昶,周李军 |
| 地址： | 美国宾夕*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 载体 多能 干细胞 培养 | ||
1.一种在微载体上使人多能干细胞向胰岛素表达细胞分化的方法，所述方法包括如下步骤：
a.使所述人多能干细胞在含有Rho激酶抑制剂的培养基中附着至一定体积的微载体，
b.在所述微载体上使用激活素A使所述人多能干细胞向定形内胚层细胞分化，
c.使所述定形内胚层细胞分化成胰腺内胚层细胞，
d.使所述胰腺内胚层细胞分化成表达胰腺内分泌细胞，以及
e.使所述胰腺内分泌细胞分化成胰岛素表达细胞。
2.权利要求1的方法，其中所述微载体选自葡聚糖微载体和聚苯乙烯微载体。
3.权利要求2的方法，其中所述微载体是葡聚糖微载体。
4.权利要求3的方法，其中所述微载体用变性胶原包被。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述微载体经过搅拌。
6.前述权利要求中任一项的方法，其中所述Rho激酶抑制剂为Y27632或Glycyl-H 1152二盐酸盐。
7.权利要求6的方法，其中附着步骤包括在含有1μM至10μM的Rho激酶抑制剂Y27632的培养基中培养人多能干细胞。
8.权利要求6的方法，其中附着步骤包括在含有0.25μM至5μM的Rho激酶抑制剂Glycyl-H 1152二盐酸盐的培养基中培养人多能干细胞。
9.权利要求1-4中任一项的方法，其中附着步骤包括以3.0x104个细胞/cm2接种。
10.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述方法还包括通过用酶处理来释放胰腺内分泌细胞。
11.权利要求10的方法，其中所述酶选自胶原酶、TrypLETMExpress、AccutaseTM和蛋白酶。
12.由权利要求1-11中任一项的方法获得的分离的胰岛素表达细胞群。
13.权利要求1的方法，其中所述人多能干细胞是来自已确立的人胚胎干细胞系的细胞或来自人胚胎生殖细胞系的细胞。
14.权利要求1的方法，其中所述人多能干细胞是衍生自非多能细胞的细胞。
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