[发明专利]一种冻干保护剂、用其制备普洱茶用直投式冻干菌剂的方法与应用

权利要求书

1.一种冻干保护剂，其特征在于，在制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂中使用，包括质量百分含量为5-15wt％生茶汤、0.5-10wt％蔗糖和余量的水；

所述生茶汤的制作过程为：按重量份数，将10份晒青毛茶浸泡于100份水中，80-100℃下浸提30-60min；浸提后冷却，取上清液灭菌，即得生茶汤；

所述直投式冻干菌剂含有的菌种为于2014年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.8683的食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxual adeninivorans)。

2.根据权利要求1所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂包括质量百分含量为8％-12％生茶汤、4-8％蔗糖和余量的水。

3.根据权利要求2所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂包括质量百分含量为10wt％生茶汤、6wt％蔗糖和余量的水。

4.一种制备普洱茶发酵用直投式冻干菌剂的方法，包括菌种的活化、菌种的增殖培养、菌体收集、预冻、真空冷冻干燥，其特征在于，预冻时使用权利要求1-3任一所述冻干保护剂；其中所述直投式冻干菌剂含有的菌种为于2014年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO.8683的食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxual adeninivorans)；

所述菌种的增殖培养为：将活化的菌种接至1/2YPD液体培养基中25-45℃增殖培养12-22h，得到增殖的菌液。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述预冻为：在由菌体组成的菌泥中按质量比1:1加入冻干保护剂，混合后在-40℃预冻至固态，得到预冻菌剂。

6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥为：将预冻得到的预冻菌剂在真空条件下继续-40℃干燥18-48h至含水量5％以下,即得到所述直投式冻干菌剂。

7.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述1/2YPD液体培养基包括大豆蛋白胨1wt％，酵母粉0.5wt％，葡萄糖1wt％和余量的水，pH4-9。

8.根据权利要求4-7任一所述方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、菌种的活化：将食腺嘌呤节孢酵母菌(Arxual adeninivorans)接种至YPD固体平板中25-45℃活化培养36-60h，挑取单菌落活化培养至第三代，得到活化的菌种；

(2)、菌种的增殖培养：将步骤(1)活化的菌种接至1/2YPD液体培养基中,控制起始OD值为0.1-0.2OD之间，25-45℃增殖培养12-22h，得到增殖的菌液；

(3)、菌体收集：将步骤(2)得到的增殖的菌液在0-4℃、6000-8000rpm离心10-20min，弃去上清液，得到菌泥；

(4)、预冻：在步骤(3)的菌泥中加入冻干保护剂，混合后-40℃预冻至固体，得到预冻菌剂；冻干保护剂与菌泥的质量比为1：1；

(5)、真空冷冻干燥：将步骤(4)的预冻菌剂真空条件下继续-40℃干燥18-48h至含水量5％以下，得到所述直投式冻干菌剂。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，步骤(1)中所述YPD固体平板作为活化培养基，包括大豆蛋白胨2wt％，酵母粉1wt％，葡萄糖2wt％，琼脂1.5wt％和余量的水，pH4-9。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，所述YPD固体平板作为活化培养基，pH为5.5-8。

11.一种由权利要求4-10任一所述方法制备得到的直投式冻干菌剂。

12.由权利要求4-10任一所述方法制备得到的直投式冻干菌剂在人工可控发酵过程和普洱茶液态发酵过程中的应用，所述直投式冻干菌剂在发酵过程中直接对普洱生茶进行发酵，无需对菌种进行活化、扩培。