[发明专利]与吊白块特异结合的核酸适配体Sf-B09及其应用

权利要求书

1.一种与吊白块特异性结合的核酸适配体Sf-B09，其特征在于：核酸适配体Sf-B09的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的与吊白块特异性结合的核酸适配体Sf-B09，其特征在于：二级结构均具有突出的环和茎，且存在G-四链体结构，吉布斯自由能分别为DG=-11.42。

3.权利要求1所述的与吊白块特异性结合的核酸适配体Sf-B09在制备识别吊白块的试剂或在制备检测吊白块的试剂盒中的应用，其特征在于：其与核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的核酸适配体Sf-A09或与核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的核酸适配体Sf-E07搭配使用。

4.根据权利要求3所述的应用，所述试剂盒为基于核酸适配体的层析法检测试剂盒，其包括检测试纸，所述检测试纸包括底板（1），粘在底板（1）上且依次搭接的样品垫（2）、结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）、吸水垫（7）；所述硝酸纤维素膜（4）上靠近结合垫（3）的一侧设有检测线（5），硝酸纤维素膜（4）上靠近吸水垫（7）的一侧设有质控线（6）；其特征在于：结合垫（3）上涂有胶体金标记的核酸适配体SF-B09；检测线（5）上涂有核酸适配体A与链霉亲和素的复合物；质控线（6）上涂有链霉亲和素溶液，其中核酸适配体A为核酸适配体Sf-A09或核酸适配体Sf-E07。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：核酸适配体SF-B09的核苷酸序列5’端被生物素标记，3’端被巯基标记；核酸适配体A的核苷酸序列5’端被生物素标记。

6.制备权利要求4或5中所述试剂盒的方法，包括如下步骤：

（1）用胶体金标记核酸适配体SF-B09；

（2）将样品垫放入含有3%牛血清蛋白、0.05%吐温-20的0.01M pH 7.4磷酸缓冲液溶液中浸泡1 小时以上，37℃烘干备用；

（3）将结合垫放入含有5%牛血清蛋白、1%聚乙二醇-20000、0.05%吐温-20、5%蔗糖的0.01M pH 7.4磷酸缓冲液溶液中浸泡1 小时以上，37℃烘干备用；

（4）将步骤（1）被胶体金标记的核酸适配体SF-B09悬浮于含有5%牛血清蛋白、1%聚乙二醇-20000、0.05%吐温-20、5%蔗糖的0.01M pH 7.4磷酸缓冲液溶液中，并喷于步骤（3）活化过的结合垫上，37℃烘干备用；

（5）在硝酸纤维素膜上检测线位置以0.5-1.5μL/cm的流量喷点核酸适配体A与链霉亲和素的复合物，在质控线位置以0.5-1.5μL/cm的流量喷点链霉亲和素溶液，烘干备用；

（6）将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接并粘合于底板上，切成检测试纸条，组装于硬质塑料卡包装。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）是用直径20-40nm的胶体金标记核酸适配体Sf-B09；步骤（5）中喷点于检测线位置的核酸适配体A与链霉亲和素的复合物是将浓度为25-35μM的核酸适配体B溶液与浓度为0.5-1.5mg/mL的链霉亲和素溶液按体积比5-3:1混合制备而成；喷点于质控线位置的链霉亲和素溶液是将链霉亲和素溶于0.01MpH7.4磷酸缓冲液溶液中制得，浓度为0.5-1.5mg/mL。