[发明专利]PLC围手术期肝移植患者环状RNA差异性表达谱图谱模型及其构建方法和构建系统

权利要求书

1.一种PLC围手术期肝移植患者环状RNA差异性表达谱图谱模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

设置疾病组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的外周血标本；

分别提取各所述外周血标本中的RNA，得到RNA溶液；

采用circRNA微阵列芯片分析疾病组和对照组RNA溶液中的circRNA表达谱，得到circRNA差异数据；

采用RT-PCR验证疾病组和对照组中circRNA的表达情况，得到对比数据；

对circRNA差异数据及对比数据进行数据分析，构建PLC围手术期肝移植患者环状RNA差异性表达谱图谱模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，分别提取各所述外周血标本中的RNA，得到RNA溶液，具体为：

各取2ml外周血标本，加入1mL TRIzol，用移液管反复吹打多次，得到第一样品；

将第一样品于15℃～30℃放置5min后，加入0.2mL的氯仿，震荡15s后，15℃～30℃孵育2min～3min；

4℃，12,000g离心15min，吸取上层水相；

将水相转移到新离心管中，加入异丙醇，混匀后15℃～30℃孵育10min，得到第二样品，其中，异丙醇的加入量为制备第一样品时加入Trizol试剂量的1/2；

将第二样品于4℃，12,000g离心10min，使RNA形成RNA沉淀，弃上清；

加入75％乙醇，振荡混匀后，4℃，7500g离心5min，弃上清；

将RNA沉淀干燥；

加入无RNA酶的水溶解RNA沉淀，55℃～60℃孵育10min，得到总RNA溶液。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，分别提取各所述外周血标本中的RNA，得到RNA溶液，具体为：

将外周血标本使用淋巴分离液分离出单个核细胞；

向单个核细胞沉淀中加入TRIzol，用移液管反复吹打多次，得到第一样品；

将第一样品于15℃～30℃放置5min后，加入0.2mL的氯仿，震荡15s后，15℃～30℃孵育2min～3min；

4℃下12,000g离心15min，吸取上层水相；

将水相转移到新离心管中，加入异丙醇，混匀后15℃～30℃孵育10min，得到第二样品，其中，异丙醇的加入量为制备第一样品时加入Trizol试剂量的1/2；

将第二样品于4℃，12,000g离心10min，使RNA形成RNA沉淀，弃上清；

加入75％乙醇，振荡混匀后，4℃，7500g离心5min，弃上清；

将RNA沉淀干燥；

加入无RNA酶的水溶解RNA沉淀，55℃～60℃孵育10min，得到总RNA溶液。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在分别提取各所述外周血标本中的RNA，得到RNA溶液之后，以及在采用circRNA微阵列芯片分析疾病组和对照组RNA溶液中的circRNA表达谱，得到circRNA差异数据之前，所述构建方法还包括如下步骤：

对总RNA进行纯化，并测定总RNA中RNA含量。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，在对总RNA进行纯化，并测定总RNA中RNA含量之后，以及在采用circRNA微阵列芯片分析疾病组和对照组RNA溶液中的circRNA表达谱，得到circRNA差异数据之前，所述构建方法还包括如下步骤：

检测纯化后的总RNA是否合格，是则执行后续步骤，其中，总RNA合格的标准为OD260/OD280比值应为1.8～2.1，且OD260/OD230比值要大于1.8。