[发明专利]一种耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法及其应用

说明书

本发明提供一种耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，包括如下步骤：步骤一：分离出泛耐药鲍曼不动杆菌；步骤二：从怀孕成虫分离虫卵，孵化，将幼虫转移到E.coli菌苔上在培养箱中继续生长，洗脱虫体后，将虫体转移到泛耐药鲍曼不动杆菌的菌苔上，在培养箱中培养8h～24h进行感染；步骤三：将虫体洗下，将其置于含有5‑FU的培养板上，过夜培养，得到同步化的秀丽隐杆线虫，药物筛选模型建立完成。本发明选用线虫为实验对象，进行体内泛耐药的鲍曼不动杆菌的药敏实验，其结果与体外药敏试验结果相互比较，具有临床参考价值，可以弥补传统的体外药敏实验筛选中的遗漏。

技术领域

本发明涉及一种耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，本发明还涉及使用耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法得到的药物筛选模型的应用。

背景技术

感染性疾病一直是我国的主要公共卫生问题之一，由于长期大量应用广谱抗生素，使得许多病原菌对抗生素产生了惊人的抗药性。近年来院内感染呈上升趋势，有些院内感染呈难治性，且为多重耐药，严重威胁到患者的健康和生命安全。鲍曼不动杆菌已成为各大医院住院患者感染中最常见的革兰阴性杆菌之一，近年来鲍曼不动杆的检出率不断上升，给感染的治疗造成很大的困难。耐药鲍曼不动杆菌的耐药率有不断增高的趋势，且经常出现多药耐药和泛耐药现象。针对泛耐药的难治性感染，临床医师往往根据经验进行抗菌药物联合用药，或者加大剂量来达到控制耐药菌感染的目的。然而经验性治疗中，鲍曼不动杆菌感染患者的转归却不同，有些患者的病情能够得到缓解甚至治愈，而有些患者却出现死亡。因此，针对特定耐药的鲍曼不动杆菌感染的最佳治疗，是快速及时的筛选药物和形成抗感染治疗方案，这是确保患者具有更好预后的重要策略。因此提供一种能够快速筛选针对性药物的模型，是这一策略的有力保障。

发明内容

本发明的目的在于提供一种耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法及其应用，以达到快速筛选针对耐药鲍曼不动杆菌的药物的目的。

本发明采用了如下技术方案：

一种耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：分离出泛耐药鲍曼不动杆菌；

步骤二：秀丽隐杆线虫感染耐药鲍曼不动杆菌：从怀孕成虫分离虫卵，孵化过夜，得到L1期幼虫，将幼虫转移到NGM培养基的E.coli菌苔上在培养箱中继续生长48h，得到L4青年成虫，用M9缓冲液洗脱虫体并清洗次后，将虫体分别转移到普通琼脂平板的泛耐药鲍曼不动杆菌的菌苔上，在培养箱中培养8h～24h进行感染，感染后转移到M9缓冲液中继续培养，观察记录每日死亡情况；

步骤三：线虫感染同步化：收集线虫生长良好的平板，用M9缓冲液将虫体洗下，离心，取上清，洗涤，将其置于含有5-FU的培养板上，过夜培养，得到同步化的秀丽隐杆线虫，药物筛选模型建立完成。

作为优选，本发明的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，其特征在于：步骤三中，离心条件为20S，取上清，重复3次。

作为优选，本发明的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，还可以具有这样的特征：以质量百分比计，M9缓冲液包含：蛋白胨2％，牛肉浸膏4％。

作为优选，本发明的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，还可以具有这样的特征：步骤二中，感染时间为16 小时。

作为优选，本发明的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，还可以具有这样的特征：步骤二中，线虫变成直线型、无移动、用铂金丝轻触无反应判为死亡。

本发明还提供一种使用上述方法建立的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫模型在药物筛选中的应用。

优选的，本发明的应用，包括如下步骤：