[发明专利]一种耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法及其应用

权利要求书

1.一种耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：分离出泛耐药鲍曼不动杆菌；

步骤二：秀丽隐杆线虫感染耐药鲍曼不动杆菌：从怀孕成虫分离虫卵，孵化过夜，得到L1期幼虫，将幼虫转移到NGM培养基的E.coli菌苔上在培养箱中继续生长48h，得到L4青年成虫，用缓冲液洗脱虫体并清洗后，将虫体分别转移到普通琼脂平板的泛耐药鲍曼不动杆菌的菌苔上，在培养箱中培养8h～24h进行感染；

步骤三：线虫感染同步化：收集线虫生长良好的平板，用缓冲液将虫体洗下，离心，取上清，洗涤，将其置于含有5-FU的培养板上，过夜培养，得到同步化的秀丽隐杆线虫，药物筛选模型建立完成。

2.如权利要求1所述的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，其特征在于：

步骤三中，离心条件为20S，取上清，重复3次。

3.如权利要求1所述的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，其特征在于：

以质量百分比计，M9缓冲液包含：蛋白胨2％，牛肉浸膏4％。

4.如权利要求1所述的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，其特征在于：

步骤二中，感染时间为16小时。

5.如权利要求1所述的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫药物筛选模型的建立方法，其特征在于：

步骤二中，还包括感染后转移到缓冲液中继续培养，观察记录每日死亡情况的步骤。

6.如权利要求1所述的方法建立的耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫模型在药物筛选中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：设置阴性对照；

步骤二：设置阳性对照；

步骤三：建立各个药物的浓度梯度；

步骤四：向各浓度梯度的药物中加入耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫模型，培养后对存活的线虫计数，线虫存活数量最多的为最适宜的治疗药物，每个药物中线虫存活数量最多的浓度为该药物的最适宜浓度。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述阴性对照为M9缓冲液，所述阳性对照为：感染了鲍曼不动杆菌但是未给药的线虫。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于：

步骤三中，药物浓度梯度分别为1000，500，250，125，62.5，31.25，15.625，7.8125μg·ml^-1。

10.如权利要求7所述的应用，其特征在于：

其中，每个浓度加入10-30条耐药鲍曼不动杆菌感染秀丽隐杆线虫模型。