[发明专利]一种检测人EGFR基因突变的液相芯片

权利要求书

1.用于人EGFR突变检测的条形码磁珠，其特征包括：

(1)条形码磁珠的尺寸70umx30umx5 um ，码磁珠不带任何核苷酸序列，PCR扩增时条码磁珠之间无任何反应和干扰，可以实现在一个反应孔内对多个项目的检测；

(2) 包被探针的微球来源于BMB ID NO.1～60任意一种，使用检测外显子18突变的磁珠选自 BMB ID NO.1～10,检测外显子19突变的磁珠选自BMB ID NO.11～40，检测外显子20突变的磁珠选自BMB ID NO.41～51，检测外显子21突变的磁珠选自BMB ID NO.52～60.针对EGFR扩增外显子18、19、20、21野生型和突变型设计的引物及探针，野生型和突变型设计探针的5’有NH₂修饰。

2.用于人EGFR突变检测的扩增引物序列，其特征在于：

检测外显子18时扩增的引物序列选自SEQ.ID.NO.1～4中一种以上序列，检测外显子19时扩增的引物选自序列SEQ.ID.NO.17～20中一种以上序列, 检测外显子20时扩增的引物选自序列SEQ.ID.NO.81～84中一种以上序列, 检测外显子21时扩增的引物选自序列SEQ.ID.NO.115～118中一种以上序列。

3.根据权利2所述，扩增EGFR exon 18序列的引物来源于SEQ.ID.NO.1～4其中的2条或4条，扩增EGFR exon 19序列的引物来源于SEQ.ID.NO.17～20其中的2条或4条，扩增EGFR exon 20序列的引物来源于SEQ.ID.NO.81～84其中的2条或4条，扩增EGFR exon 21序列的引物来源于SEQ.ID.NO.115～118其中的2条或4条。

4.用于人EGFR突变检测的探针序列，其特征在于：

检测外显子18上的突变位点的探针序列来源于SEQ.ID.NO.5～16中一种以上序列, 检测外显子19上的突变位点的探针序列来源于SEQ.ID.NO.21～80中一种以上序列, 检测外显子20上的突变位点的探针序列来源于SEQ.ID.NO.81～114中一种以上序列, 检测外显子21上的突变位点的探针序列来源于SEQ.ID.NO.119～130中一种以上序列；以上特异性探针序列的3’端的最后1～6个碱基中的一个或几个为突变碱基，上述所有的特异性引物的TM值60～66之间。

5.根据权利4要求，检测人EGFR突变的探针序列设计，其特异性从3’端的-2位碱基位错配碱基。