[发明专利]醛固酮衍生物、免疫原、及合成方法、特异性抗体和检测试剂及制备方法、试剂盒

权利要求书

1.一种醛固酮衍生物，其特征在于，所述醛固酮衍生物的结构如式(Ⅰ)所示，

2.一种如权利要求1所述的醛固酮衍生物的合成方法，其特征在于，包括：

使醛固酮的羧羟基发生卤代反应得到卤化物；

以所述卤化物为底物，与4-氨基丁酸叔丁酯发生伯胺卤代反应得到含有仲胺基团的中间产物；

对所述中间产物中的仲胺基团进行保护后，在酸性条件下发生酯基水解反应；

其中，在使醛固酮的羧羟基发生卤代反应中，卤代反应使用的卤化试剂为氯化锂和甲磺酰卤；

其中，在对所述中间产物中的仲胺基团进行保护时，采用Boc酸酐作为保护剂。

3.一种醛固酮免疫原，其结构式如式(Ⅱ)所示，

其中，-NH-(CH₂)₃-CO-为连接基团；X是载体，且为具有免疫原性的蛋白质或多肽；

所述具有免疫原性的蛋白质包括血清蛋白、血蓝蛋白、以及甲状腺球蛋白中的任一种。

4.根据权利要求3所述的醛固酮免疫原，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质为牛血清白蛋白。

5.一种如权利要求3或4所述的醛固酮免疫原的合成方法，其特征在于，包括：

使半抗原与所述载体连接，所述半抗原具有如式(Ⅰ)所示的结构式，

使所述半抗原与所述载体连接的方法包括：

以碳化二亚胺类物质为偶联剂，使所述载体中的氨基与所述半抗原中的羧基发生偶联反应，所述碳化二亚胺类物质包括二乙基碳化二亚胺、二苯基碳化二亚胺、二丙基碳化二亚胺、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺中的一种或多种；

使所述载体中的氨基与所述半抗原中的羧基发生偶联反应的方法包括：提供由所述载体分散于磷酸缓冲液中得到的载体溶液；提供由所述半抗原分散于二甲基甲酰胺、乙醇、磷酸钾缓冲液、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺混合而成的半抗原混合液；将所述半抗原混合液滴加至所述载体溶液中，在2～8℃下搅拌过夜，纯化。

6.一种抗醛固酮特异性抗体，其特征在于，所述抗醛固酮特异性抗体为采用如权利要求3或4所述的醛固酮免疫原免疫动物后产生的抗体分子、或抗体片段、或抗体衍生物，所述抗体片段和抗体衍生物均保留与醛固酮进行特异性结合能力。

7.根据权利要求6所述的抗醛固酮特异性抗体，其特征在于，所述抗体分子、抗体片段、抗体衍生物均为：采用单一的醛固酮免疫原对动物加强免疫所获得的多克隆抗体；

或者，所述抗体分子、抗体片段、抗体衍生物均为：采用单一的醛固酮免疫原对动物加强免疫后，经所述动物体细胞杂交获得的单克隆抗体，其中，所述动物包括兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠、以及马中的任一种。

8.一种如权利要求5或6或7所述的抗醛固酮特异性抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

对动物进行注射第一异体溶液，所述第一异体溶液由经稀释后的所述醛固酮免疫原与弗氏完全佐剂混合而成；

在经过第一预设时间后，以预设的周期对所述动物进行多次注射第二异体溶液，所述第二异体溶液由经稀释后的所述醛固酮免疫原与弗氏不完全佐剂混合而成；

在经过以预设的周期对所述动物多次进行注射第二异体溶液后，对所述动物进行取血，并提取抗体；

其中，所述第一异体溶液由经磷酸盐缓冲液稀释后的所述醛固酮免疫原与弗氏完全佐剂混合而成；

所述第二异体溶液由经磷酸盐缓冲液稀释后的所述醛固酮免疫原与弗氏不完全佐剂混合而成；

经磷酸盐缓冲液稀释后的所述醛固酮免疫原的含量为1.0mg/mL，所述第一预设时间为2～3周，所述预设的周期为四周，对所述动物进行四次注射第二异体溶液。