[发明专利]一种HPLC‑MS/MS法检测动物源性食品中抗球虫药物残留的样品前处理方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学及兽药残留分析技术领域，具体涉及HPLC-MS/MS法检测动物源性食品中聚醚类和均三嗪类抗球虫药物残留的样品前处理方法。

背景技术

样品前处理是兽药残留检测过程中的最基本步骤，也是影响检测准确度，精密度，灵敏度的关键。待检样品通过样品前处理的提取、净化、浓缩等过程后，可减少或消除基质干扰，分离浓缩待测目标物，从而达到保护仪器，提高检测方法灵敏度的目的。传统的样品前处理方法有索氏提取、蒸馏、过滤、液液萃取、色谱分离等，这些方法在不同程度上存在操作复杂，耗时长，有机溶剂消耗量大，容易引进误差，污染环境等问题。因此，建立快速、简便、高效、绿色的样品前处理技术是目前残留分析的重要发展方向之一。

近年来，新型的样品前处理技术不断涌现，如液液微萃取(LLME)，固相微萃取 (SPME)，基质分散固相萃取(MSPDE)，分子印迹固相萃取(MISPE)，磁性固相萃取(MSPE)等。其中，MSPE由于绿色环保，提供快速分离等特性脱颖而出。MSPE 以磁性功能吸附剂为基础，将磁性吸附剂加入到样品溶液中，经过一段时间的作用，目标分析物附着到磁性吸附剂上。接着，通过外加磁场的作用将吸附剂与样品溶液分离。然后用合适的洗脱液将目标分析物从磁性吸附剂上洗脱下来，收集洗脱液，以便进一步的上机分析。

与传统的样品前处理方法相比，MSPE具有以下优势：(1)绿色环保，萃取过程中消耗的有机溶剂量相对较少，磁性吸附剂可回收利用，降低了样品前处理的成本；(2) 操作简便，不需要固相萃取小柱，节省了过柱时间，避免了过柱堵塞问题，提高了萃取效率；(3)由于吸附剂的超顺磁性，可将目标分析物与样品溶液快速分离；(4)样品中大多数杂质为反磁性物质，可有效降低杂质对分析过程的干扰；(5)磁性吸附剂易于合成，具有高比表面积和高吸附容积；(6)可根据目标化合物的性质对吸附剂进行修饰，以提高对待测物的选择性；(7)自动化易于实现。基于以上优点，MSPE已成为近年来迅速发展的样品前处理技术。

磁性功能材料是MSPE的核心。它在磁场的作用下，能够快速聚集并从样品溶液中分离出来，从而简化并加速分离过程。磁性功能材料具有超顺磁性，纳米量级，高比表面积，高吸附容积，高吸附效率，表面基团丰富可修饰，可重复利用等特点。

石墨烯是一种新型的二维碳基纳米材料，具有sp²杂化的碳原子，呈蜂窝状排列，是目前已知的世界上最薄的纳米材料。它具有高比表面积，高导电导热，高弹性等特点。石墨烯表面具有π共轭体系，也可与含有共轭系统的分子形成π-π相互作用。同时，石墨烯也可通过静电作用力，氢键，疏水作用力，范德华力等分子间作用力吸附目标分析物。将石墨烯作为非磁性部分，与铁氧化物作为磁性部分合成的磁性功能材料将很好的用于MSPE中。经文献调研发现石墨烯间存在很强的分子间作用力，因此石墨烯容易团聚堆积，并导致其实际表面积大大降低，这对石墨烯的应用造成了很大的困难。而还原氧化石墨烯表面含有大量的含氧官能团，提高了其在水中的分散性，也提高了它的吸附效果。同时，将还原氧化石墨烯与Fe₃O₄磁性纳米颗粒结合，也可减少还原性石墨烯的重新堆叠。

聚醚类和均三嗪类药物是当前预防和治疗球虫病常用的两种广谱抗球虫药，具有低毒高效的特点，常用作饲料添加剂。聚醚类抗球虫药包括莫能菌素、盐霉素、那拉霉素、马杜霉素、拉沙洛菌素、南昌霉素。均三嗪类抗球虫药地克珠利、妥曲珠利及其代谢产物妥曲珠利砜。这两类药物在发挥抗球虫作用的同时，有可能残留于动物组织中给动物性食品安全带来风险，国内外均制定了这两类药物在动物组织中的最高残留限量。建立动物源性食品中聚醚类和均三嗪类抗球虫药残留的检测方法具有重要意义。

在样品前处理方面，聚醚类和均三嗪类抗球虫药残留检测时所选方法主要是传统的液液萃取、固相萃取，也有一些新型样品前处理方法，如QuEChERS、基质固相分散萃取等，尚没有磁性固相萃取的方法被报道。液液萃取方法消耗有机试剂较多，提取杂质较多；固相萃取方法但操作复杂，耗时长，固相萃取柱成本较高；QuEChERS和基质固相分散萃取吸附剂较难与样品溶液分离。而磁性固相萃取方法可通过磁性作用实现快速分离，操作简便，消耗有机溶剂量少，成本较低，绿色环保。