[发明专利]体外重折叠波形蛋白的方法及其应用

权利要求书

1.体外重折叠野生型或突变型波形蛋白的方法，包括以下步骤：

使重组表达获得的野生型或突变型波形蛋白制备物与pH为8的包含尿素和二硫苏糖醇的缓冲液接触以溶解所述制备物，并获得蛋白溶液，其中所述缓冲液中尿素的浓度为8M，二硫苏糖醇的浓度为10mM；以及

在氧化还原混合物存在下，通过透析法阶段式降低蛋白溶液中尿素的浓度，以重折叠野生型或突变型波形蛋白，其中阶段式降低蛋白溶液中尿素的浓度包括通过透析法将所述包含尿素和二硫苏糖醇的缓冲液中尿素的浓度阶段性地降低至初始浓度的50％、25％和0％，其中使用包含尿素并且尿素的浓度梯度降低的三种透析液，所述三种透析液中尿素的浓度分别为所述包含尿素和二硫苏糖醇的缓冲液中尿素的浓度的50％、25％和0％；

其中所述突变型波形蛋白为相对于人野生型波形蛋白，在16和59位氨基酸残基突变为精氨酸。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述野生型或突变型波形蛋白制备物通过以下步骤获得：

使宿主细胞表达野生型或突变型波形蛋白；

裂解宿主细胞，获得包涵体形式的野生型或突变型波形蛋白制备物。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述氧化还原混合物为还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽。

4.如权利要求3所述的方法，其中还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽的比例为10:1。

5.包含以下的试剂盒在体外重折叠野生型或突变型波形蛋白中的用途：pH为8、包含浓度为10mM的二硫苏糖醇和浓度为8M的尿素的缓冲液，以及包含尿素并且尿素的浓度梯度降低的三种透析液，所述三种透析液中尿素的浓度分别为所述包含二硫苏糖醇和尿素的缓冲液中尿素的浓度的50％、25％和0％。

6.如权利要求5所述的用途，其中所述试剂盒还包含氧化还原混合物。

7.如权利要求6所述的用途，其中所述氧化还原混合物为还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽。

8.如权利要求7所述的用途，其中还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽的比例为10:1。

9.如权利要求5所述的试剂盒，其中所述包含二硫苏糖醇和尿素的缓冲液还包含300mMNaCl和1mM EDTA。