[发明专利]具有高抗原呈递的DC细胞和抗原特异性T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种具有高抗原呈递的DC细胞和抗原特异性T细胞及其制备方法和应用。在DC细胞上负载抗原，并向DC细胞内转染基因表达沉默剂得到所述具有高抗原呈递的DC细胞。在DC细胞与T细胞共同培养的过程中加入四环素调控DC细胞内的基因表达沉默剂的开关，使得DC细胞和T细胞相互接触并形成免疫突触结构的过程中抑制DC细胞内具有负调控作用的Tao‑1蛋白磷酸激酶的基因表达，增加免疫突触形成的时间和强度，提高形成的免疫突触的稳定性。结果表明，上述具有高抗原呈递的DC细胞与T细胞之间的抗原呈递效率更高，能够刺激获得更成熟、更活化、更具抗原特异性的T细胞。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种具有高抗原呈递的DC细胞和抗原特异性T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，自体免疫细胞治疗肿瘤成为继手术、放疗、化疗后最有前景的肿瘤治疗方法。DC细胞(Dendritic cell，树突状细胞)是人体已知的最重要的抗原呈递细胞，在介导肿瘤抗原特异性细胞免疫及肿瘤免疫应答方面所起的作用成为人们研究之热点。DC细胞介导的肿瘤特异性抗原呈递及T细胞免疫应答，既是肿瘤发病早期机体对抗肿瘤的有效手段，也是肿瘤发生免疫逃逸的重要机制。

在体内DC细胞与T细胞(Thymus-dependent lymphocyte，胸腺依赖性淋巴细胞)进行抗原传递的过程中有一个关键的步骤：形成免疫突触(Immunologic synapse，IS)结构。免疫突触的结构请参阅图1，具体形成过程如下：大量T细胞游走于淋巴结等淋巴器官，当T细胞遇到DC细胞时其运动速度减低并被DC细胞捕获，接受外源信号后T细胞发生极化反应，T细胞产生伪足，并形成适合分子信号传递的三维空间结构。细胞质内以微管组织中心(Microtubule organization center,MTOC)移动到靠近DC细胞的一侧边缘为基本特征的一系列细胞器重组变化发生，其表面粘附分子通过受体－配体相互作用得以紧密接触DC细胞，形成了一个临时性结构，该结构以TCR-MHC-抗原肽三元结构为簇状中心，周围环形分布着粘附分子，该结构即为免疫突触(Immunologic synapse，IS)结构。

然而，目前体外培养的DC细胞-T细胞之间存在抗原呈递效率不高，T细胞特异性免疫应答效果不理想等缺陷。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够制备抗原呈递效率高的具有高抗原呈递的DC细胞的制备方法以及一种能够提高T细胞特异性免疫应答效果的抗原特异性T细胞的制备方法。

一种具有高抗原呈递的DC细胞的制备方法，包括以下步骤：

提供DC细胞；

在所述DC细胞上负载抗原；以及

向所述DC细胞内导入基因表达沉默剂，所述基因表达沉默剂用于沉默Tao-1蛋白磷酸激酶基因的表达，得到所述具有高抗原呈递的DC细胞。

在一个实施方式中，所述基因表达沉默剂为所述Tao-1蛋白磷酸激酶的shRNA。

在一个实施方式中，所述Tao-1蛋白磷酸激酶的shRNA的正义链的碱基序列如SEQID No.1所示，所述Tao-1蛋白磷酸激酶的shRNA的反义链的碱基序列如SEQ ID No.2所示。

一种具有高抗原呈递的DC细胞，所述具有高抗原呈递的DC细胞通过上述具有高抗原呈递的DC细胞的制备方法制备得到。

一种抗原特异性T细胞的制备方法，包括以下步骤：

提供DC细胞；

在所述DC细胞上负载抗原；

向所述DC细胞内导入基因表达沉默剂，所述基因表达沉默剂用于沉默Tao-1蛋白磷酸激酶基因的表达，得到具有高抗原呈递的DC细胞；