[发明专利]一种卡那霉素残留荧光免疫层析试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种卡那霉素残留荧光免疫层析试纸条，包括样品垫，抗体结合垫，NC纤维素膜，吸水纸，自下而上依次通过带有粘合剂的底板互相搭接而成，其特征在于，所述NC纤维素膜上从靠近抗体结合垫一段分别依次包被检测线和质控线，所述抗体结合垫承载荧光标记抗体的结合物，所述NC纤维素膜自上而下分别设有用偶联抗原喷划的检测线T线和用羊抗鼠二抗IgG喷划的质控线C线；

其中荧光标记探针是以醛基化葡聚糖作为交联剂，将BHHCT-Eu³⁺@SiO₂荧光纳米颗粒经醛基化葡聚糖修饰后与抗体进行交联，形成荧光标记探针，具体方法如下：

(1)200mg葡聚糖，溶于0.03M高碘酸钠5ml溶液，避光，室温反应过夜，然后用超纯水透析过夜，除去未反应的小分子，4℃储存备用；

(2)取卡那霉素抗体，以25mM pH8.0碳酸盐缓冲液透析过夜；

(3)取制备好的BHHCT-Eu³⁺@SiO₂荧光纳米颗粒4mg悬浮于400μL 25mM pH9.6的碳酸盐缓冲液中，再加入400μL醛基化葡聚糖，避光反应7h；以25mM pH9.6的碳酸盐缓冲液洗涤3遍，悬浮于200μL 25mM pH9.6的碳酸盐缓冲液中；

(4)将透析好的卡那霉素抗体200μL与上述醛基化葡聚糖修饰的荧光纳米颗粒混合，4℃反应过夜；加硼氢化钠，终浓度为5mM，4℃反应4h，再加等体积的50mM pH7.8 Tris-HCl缓冲液封闭液封闭12h，所述Tris-HCl缓冲液含2％BSA，4％蔗糖；

(5)最后用50mM pH7.8Tris-HCl缓冲液洗涤颗粒3遍，然后用100μL 50mM pH7.8 Tris-HCl缓冲液悬浮备用，所述Tris-HCl缓冲液含0.9％NaCl，0.2％BSA，0.05％Tween 20，0.1％NaN₃；

其中稀土荧光二氧化硅纳米颗粒BHHCT-Eu³⁺@SiO₂，由以下方法制备：

(1)二氧化硅纳米颗粒的制备：取环己烷6mL、Tx-1002.13mL、正辛醇1.87mL和0.6mL超纯水加入锥形瓶中，磁力搅拌，待搅拌均匀后，依次加入100μL TEOS和60μL氨水，室温搅拌24h，得到SiO₂纳米微乳液；

(2)二氧化硅纳米颗粒表面氨基化：取3μL 3-氨基丙基三甲氧基硅烷(APTMs)加入到(1)中得到的SiO₂纳米微乳液中，微波加热，微波功率700W，温度70℃，反应时间考察20min；

(3)BHHCT-Eu³⁺荧光稀土络合物的合成：将5mg 4，4′-二(1″，1″，1″，2″，2″，3″，3″-七氟-4″，6″-己二酮-6”-基)-氯磺酰-邻-三联苯(BHHCT)溶于700μL无水乙醇，加入4.84μL Eu³⁺，制得荧光稀土络合物；

BHHCT-Eu³⁺修饰的二氧化硅荧光纳米颗粒的制备：将步骤(3)中得到的荧光稀土络合物加入到(2)中微乳液体系，微波加热，微波功率700W，温度59℃，反应时间考察20min；加入5mL丙酮，混匀，离心，再用v∶v是1∶1的乙醇/水洗涤颗粒3次，最后用无水乙醇洗涤颗粒1次，离心，烘干，即得产物稀土荧光 二氧化硅纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的卡那霉素残留荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫和抗体结合垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；吸水纸用吸水滤纸制成，底板用不吸水的韧性材料制成。

3.根据权利要求1所述的卡那霉素残留荧光免疫层析试纸条，其特征在于，NC纤维素膜是M130，AE99，M90中的一种。

4.根据权利要求1所述的卡那霉素残留荧光免疫层析试纸条，其特征在于，偶联抗原的载体蛋白为牛血清蛋白，鸡卵清蛋白或血蓝蛋白中的一种。