[发明专利]一种蛹虫草活性组分的分离纯化方法

说明书

本发明公开的是一种蛹虫草活性组分的分离纯化方法，具体包括以下步骤：将蛹虫草烘干粉碎，蛹虫草粉末用75％‑100％乙醇抽提，提取的上清液旋干得到固体，将固体用水溶解后与Oligo(dT)进行亲和，水浴加热，去除上清液，获得虫草素溶液，本发明通过酒精将蛹虫草中的核酸类物质去除，避免了后续过程中的核酸污染，通过亲和层析来分离纯化虫草素，吸附性强，特异性高，避免了有效损失，提高了有效成分的纯度，生产周期短，成本低，对设备要求低，操作简单，易于推广市场潜力大，分离纯化过程避开了有害溶剂的污染，提取物安全无毒，绿色环保。

技术领域

本发明涉及一种分离纯化方法，更具体一点说，涉及一种蛹虫草活性组分的分离纯化方法。

背景技术

蛹虫草为子囊菌门，肉座目，麦角菌科、虫草属的模式种，学名为Cordycepsmilitaris，又名北蛹虫草。蛹虫草中含有多种化学成分，具有多种药用功效，与冬虫夏草的药理功能和临床效果相似，但价格却远远低于冬虫夏草，因此蛹虫草逐渐成为冬虫夏草的替代品，具有极大的潜在市场。其主要活性成分包括腺苷、虫草素、虫草多糖等，目前研究最多应用最广的无疑是虫草素，鉴于虫草素抗肿瘤等活性，人们对虫草素的需求也越来越大。

目前获得虫草素的方式主要是通过分离提取获得，虫草素常规提取方法如水提法，水提醇沉法，醇提法等，提取过程单一，无法彻底提取蛹虫草中的有效成分，而辅助提取手段通常有微波、超声、酶法等，国内关于虫草素分离的技术手段主要为层析法，从总体上而言，这些提取方法在保留有效成分，弃除无效成分方面，仍存在提取不够充分，有效成分损失大，工序多，周期长，成本高等缺点。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术问题，提供具有分离简单、纯度高、周期短等技术特点的一种蛹虫草活性组分的分离纯化方法。

本发明是通过以下技术方案实现：

本发明一种蛹虫草活性组分的分离纯化方法，该方法采用如下步骤：

步骤1)：将蛹虫草置于50-70℃条件下烘干至蛹虫草含水量在8％以下，超微粉碎5-15min，获得超微蛹虫草粉；

步骤2)：将步骤1)获得的超微蛹虫草粉加入到浓度为75-100％的乙醇溶液中，充分搅拌溶解，超声30-60min，静置1-12h，置于转速为8000-10000rpm离心机内离心获取上清液，重复1-2次，合并上清液；

步骤3)：将步骤2)合并的上清液旋干获得固体，将固体置于烧杯中，缓慢加入蒸馏水溶解，并充分搅拌，获得浓度为0.9-1.1mg/ml溶液，再将溶液置于转速为8000-10000rpm离心机内离心，获得初步提取液；

步骤4)：按质量份数，将400-600份偶联了Oligo(dT)的磁珠用400-600份水洗涤两次，加入100-300份初步提取液，重置磁珠，置于室温条件下反应5-10min，用磁性分离器进行磁性分离，在磁性分离器上用移液器将上清液弃去；再加入100-300份水，混匀磁珠，用磁性分离器进行磁性分离，在磁性分离器上用移液器移取上清液弃去，重复两次；继续加入50-200份水，混匀磁珠，置于65-100℃水浴加热5-30min，快速置于磁性分离架上，进行磁性分离，快速收集上清液，获得虫草素溶液。

作为一种优选，步骤2)中所述微蛹虫草粉与浓度为70-100％乙醇质量比为1:5-20。

本发明一种蛹虫草活性组分的分离纯化方法，该方法采用如下步骤：

步骤1)：将蛹虫草置于60℃条件下烘干至蛹虫草含水量在8％以下，超微粉碎8min，获得超微蛹虫草粉；

步骤2)：将步骤1)获得的超微蛹虫草粉加入到浓度为85％的乙醇溶液中，充分搅拌溶解，超声45min，静置8h，置于转速为9000rpm离心机内离心获取上清液，重复1次，合并上清液；