[发明专利]一种利用暗场显微镜肉眼直接观察隐孢子虫的方法

权利要求书

1.一种利用暗场显微镜肉眼直接观察隐孢子虫的方法，其特征在于，将隐孢子虫卵囊抗体和包被有蛋白A的磁珠进行偶联，构建具有特异性捕获隐孢子虫的磁探针；用该探针捕获待测样品中的隐孢子虫卵囊，在暗场显微镜观察结果。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤如下：

(1)磁珠的清洗：将包被有蛋白A的磁珠进行清洗，获得分散性较均一的磁珠；

(2)抗体的偶联：将隐孢子虫卵囊抗体和步骤(1)中清洗后的磁珠混合，进行新和偶联，获得具有特异捕获隐孢子虫能力的磁探针；

(3)将步骤(2)中磁探针与待测样本孵育一段时间，得混合液；

(4)磁分离上述混合液，用PBS重悬混合物后，滴加到载玻片上，暗场显微镜观察。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，步骤如下：

(1)磁珠的清洗：将包被有蛋白A的磁珠与含有BSA的PBS溶液进行混合，磁分离后静置，弃上清，重悬于含有BSA的PBS溶液中，超声后磁分离，弃上清，洗涤后重悬于含有BSA的PBS溶液中，获得分散性较均一的磁珠；

(2)抗体的偶联：将商品化隐孢子虫卵囊抗体和步骤(1)中清洗后的磁珠按照质量比为1:1-2:5混合，常温孵育1-6h；然后磁分离洗涤未结合抗体，最后用含BSA的PBS溶液洗涤后重悬于PBS溶液中，获得具有特异捕获隐孢子虫的磁探针；

(3)用步骤(2)构建好的磁探针对待测样品中的隐孢子虫进行捕获，所述磁探针添加量为每200μL样本溶液加入50-100μL磁探针；

(4)取步骤(3)中的10-20μL混合液滴加到载玻片上，暗场显微镜观察。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述磁珠的直径是微米级到纳米级的磁颗粒。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述磁珠清洗所用的BSA的浓度为1％，每次清洗的时间为5min，清洗次数为3次。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述抗体和磁珠偶联时间为30-60min。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述样品，为水样、乳制品和粪便样品。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述磁探针捕获隐孢子虫的时间为30-60min。