[发明专利]月季花瓣中类黄酮色素的高效快速提取及测定方法

说明书

本发明提供月季花瓣中类黄酮色素的高效快速提取及测定方法，包括步骤：a制备类黄酮标准品溶液；b制备类黄酮待测样品溶液；c高效液相色谱分析；d液质联用分析，获得月季花瓣中类黄酮的质谱信息；e根据保留时间、紫外可见吸收光谱图、质谱图、类黄酮标准品和和文献资料对月季花瓣样品中类黄酮的结构进行鉴定；f根据类黄酮标准品的线性回归方程，对月季花瓣样品中的类黄酮进行定量分析。本发明方法具有操作简单、节约时间、提取高效、重复性好等特点，所需样品用量少，检测结果准确可靠，是一种从月季花瓣中进行类黄酮色素提取以及定性、定量分析的优良方法。

技术领域

本发明涉及类黄酮色素的提取方法，具体地说，涉及月季花瓣中类黄酮色素的高效快速提取及测定方法。

背景技术

月季属于蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)，是世界四大切花之一，同时还是一种重要的中药材。月季花瓣拥有除蓝色以外的所有色谱，类黄酮色素是赋予其颜色的主要物质。在植物体内，黄酮化合物具有抗逆、抗病虫害、抗氧化等重要的生理功能。在食品和医药领域，黄酮化合物不仅是一种重要的天然色素，同时还具有抗衰老、抗炎症、抗肿瘤等潜能。因此，研究类黄酮色素的种类和含量，对有效评估和利用月季种质资源具有重要意义。

根据申请人所做的资料检索，现有的月季花瓣类黄酮提取测定方法存在操作步骤繁琐、样品浪费多、耗时较长等缺点。Mikanagi等 (2000)取新鲜月季花瓣1.0kg，用10L甲醇-醋酸-水(9:10:1)提取，然后经过一系列浓缩、纯化等步骤后进行HPLC分析，鉴定出了11中花青苷，但未对黄酮醇进行分离鉴定。Kumar等(2009)、Sarangowa 等(2014)利用甲醇或甲醇-水(1:1)提取突厥蔷薇、复伞房蔷薇和法国蔷薇花瓣中的黄酮醇，但由于浸提剂pH太高，提取不到样品中的花青苷。张玲(2015)取250mg玫瑰花瓣干样，用1％的醋酸甲醇溶液低温避光静置过夜提取三次，最后在50ml容量瓶中定容，整个提取过程长达十几个小时。因此急需建立一种月季花瓣中类黄酮色素的高效提取和测定方法，使其具备操作简单、节约时间、提取效率高以及可同时测定花青苷和黄酮醇的特点。

发明内容

本发明的目的是提供月季花瓣中类黄酮色素的高效快速提取及测定方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的月季花瓣中类黄酮色素的高效快速提取及测定方法，包括以下步骤：

S1、称取类黄酮标准品，用浸提剂溶解，制备类黄酮标准品溶液；

S2、向月季花瓣样品中加入浸提剂，在均质破碎仪上研磨，利用超声波辅助提取，制备类黄酮待测样品溶液；

S3、高效液相色谱分析(HPLC)；

S4、液质联用分析(LC-MS)，获得月季花瓣中类黄酮的质谱信息；

S5、根据保留时间、紫外可见吸收光谱图、质谱图、类黄酮标准品和和文献资料对月季花瓣样品中类黄酮的结构进行鉴定；

S6、根据类黄酮标准品的线性回归方程，对月季花瓣样品中的类黄酮进行定量分析。

本发明中使用的浸提剂为甲醇、水、甲酸和三氟乙酸按70：27： 2：1体积比的配制的混合液。

本发明中使用的均质破碎仪为MP FastPrep-24，运行速度5m/s，研磨时间30s。

本发明中利用超声波清洗器(KQ-250DA)进行超声辅助提取，功率100％，提取时间30min，期间通过加入冰块降温使提取温度不超过25℃。