[发明专利]月季花瓣中类黄酮色素的高效快速提取及测定方法

权利要求书

1.月季花瓣中类黄酮色素的高效快速提取及测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、称取类黄酮标准品，用浸提剂溶解，制备类黄酮标准品溶液；

S2、向月季花瓣样品中加入浸提剂，在均质破碎仪上研磨，利用超声波辅助提取，制备类黄酮待测样品溶液；

S3、高效液相色谱分析；

S4、液质联用分析，获得月季花瓣中类黄酮的质谱信息；

S5、根据保留时间、紫外可见吸收光谱图、质谱图、类黄酮标准品对月季花瓣样品中类黄酮的结构进行鉴定；

S6、根据类黄酮标准品的线性回归方程，对月季花瓣样品中的类黄酮进行定量分析；

步骤S1和S2中使用的浸提剂为甲醇、水、甲酸和三氟乙酸按70：27：2：1体积比的配制的混合液；

步骤S2中利用超声波清洗器进行超声辅助提取，功率100％，提取时间30min，期间通过加入冰块降温使提取温度不超过25℃；

步骤S2中使用的均质破碎仪为MP FastPrep-24，运行速度5m/s，研磨时间30s；

步骤S2具体为：称量0.15-0.25g月季花瓣样品，置于液氮速冻后的2ml研磨管中，迅速加入0.9ml浸提剂，进行自动研磨；然后再加入0.9ml浸提剂，进行超声波辅助提取；然后将提取液进行离心；最后将上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，装于2ml安捷伦上样小瓶中，用于高效液相色谱检测分析；

步骤S3中使用的色谱柱为XBridge BEH C18，规格150mm×4.6mm，2.5μm，流动相为乙腈和0.5％甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.5ml/min，进样量10μl，柱温箱温度25℃，200-600nm全波长扫描，花青苷检测波长520nm；黄酮醇检测波长350nm；

梯度洗脱条件为：0min，5％乙腈；5min，10％乙腈；30min，19％乙腈；50min，40％乙腈；50.01-60min，5％乙腈；

步骤S4中采用HPLC-microTOF-Q MS液质联用仪获得质谱信息；全扫描电喷雾电离，正/负离子模式，扫描范围100-1000m/z，毛细管电压3500V，毛细管出口电压500V，干燥温度350℃，干燥和喷雾气体为氮气，流速为8.0L/min，正、负离子模式的碰撞电压分别为8.0eV和10.0eV；

对正/负离子模式下的扫描结果基于保留时间进行离子提取，得到每个峰对应的质谱信息；

测得月季花瓣中所含类黄酮色素的结构和性质表征如下：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S6具体为：记录各种类黄酮色素标准品每个浓度对应的峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制各标准品的标准曲线，得到相应的线性回归方程；然后将鉴定出的类黄酮色素的峰面积代入对应标准品的回归方程中，计算得到待测样品中对应物质的含量，如果鉴定出的类黄酮色素与8种标准品均不相同，则利用与其结构最相近的标准品的回归方程来计算含量。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1具体为：称取2mg类黄酮标准品，加入4ml浸提剂配制成浓度500μg/ml的母液，然后依次稀释2倍，得到6个浓度梯度的标准品溶液，用以绘制标准曲线；

其中，所述类黄酮标准品包括矢车菊-3,5-双氧葡萄糖苷、天竺葵-3,5-双氧葡萄糖苷、芦丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、槲皮素和山奈酚。