[发明专利]利用气味指纹图谱快速鉴定玛咖品质的方法

权利要求书

1.利用气味指纹图谱快速鉴定玛咖品质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)玛咖粉的制备

样品先去除须根和顶部，用自来水冲洗干净，再用去离子水冲洗3次；切成3mm的薄片，37℃鼓风干燥至含水量为6％～9％，粉碎并过60目筛，收集60目以上的样品，用自封袋封存备用；

(2)芥子油苷的提取

称取制备好的粉末200.0mg至50mL离心管，加入15mL 80％的甲醇，84℃水浴30min，迅速冷却至0℃，4000r/min离心10min；取上清液2mL加入葡聚糖离子交换柱中，封存半小时待柱子平衡，排干上清液；分两次加入2mL 0.02mol/L醋酸钠溶液，两次均排干；加入75μL硫酸酯酶溶液至离子交换柱，室温反应16h；分别用0.5mL去离子水冲洗离子交换柱三次，收集洗脱液，过0.45μm滤膜待测，每个样品重复测定三次；其中，所述硫酸酯酶溶液的活性不低于0.5U/mL；

(3)标准曲线的制作

用苯甲基硫代葡萄糖苷作标准对照品；称取10mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于5mL水中，得到20mg/mL的苯甲基硫代葡萄糖苷标准液，分别吸取上述标准液0.1、0.5、2.5、5mL，定容至10mL，制备浓度为0.2、1、5、10mg/mL的标准液，经HPLC测定，以峰面积为纵坐标，以苯甲基硫代葡萄糖苷浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程y＝265653x-3216，R²＝1，在0～10mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系；

HPLC测定条件为：色谱柱：Waters C₁₈柱，5μm，3.9mm×150mm；流动相：A：水B：乙腈；梯度洗脱，流速：1.0mL/min；柱温30℃；紫外检测器检测波长229nm；进样量10μL；

梯度洗脱条件如下：

(4)玛咖粉中芥子油苷含量测定

对步骤(2)提取的芥子油苷进行HPLC测定，测定条件同步骤(3)；

(5)电子鼻顶空进样

称取1.500±0.001g步骤(1)的玛咖粉至20mL顶空瓶中，每个样品三个平行，置于样品盘中待测；

使用带18根MOS传感器的FOX4000型电子鼻进行数据采集，仪器参数如下：采集时间120s；数据采集延迟1080s；进样量4000μL；进样速度1000μL/s；自动进样仪参数：孵化器120s；孵化温度50℃；注射器温度60℃；

(6)芥子油苷含量与电子鼻传感器之间的相关性

采用SPSS22.0软件，通过对芥子油苷含量与传感器响应值进行pearson相关性分析，选取与芥子油苷含量显著相关的T30/1、P30/1、P30/2三根传感器用于后续鉴定模型的建立；

(7)SIMCA建模

基于SIMCA算法构建了两个分析模型：模型Ⅰ和模型Ⅱ；

模型Ⅰ：第一级将训练集样品划分成两个区域：一等品区和二、三等品区，第二级是将二、三等品区划分为二等品区和三等品区；

模型Ⅱ：第一级将训练集样品划分成两个区域：三等品区和一、二等品区，第二级是将一、二等品区划分为一等品区和二等品区；

可根据样品中芥子油苷的含量分布情况选择不同模型进行玛咖品质鉴定；

采用拒绝率和接受率相结合的方法，评价SIMCA模型的鉴定效果：

接受率＝(正确识别目标样品集的个数/未知样本的总个数)×100％

拒绝率＝(正确识别非目标样品集的个数/未知样本的总个数)×100％；

(8)待测样品的检测

将待测样品依次按照上述相同的方法进行预处理、芥子油苷的提取及含量测定、电子鼻数据采集，并将得到的数据投影到步骤(7)建立的标准鉴定模型中，得到待测样品的气味指纹图谱，利用该图谱鉴定待测样品的品质和等级。