[发明专利]月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取及测定方法

说明书

本发明提供月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取及测定方法，包括步骤：a制备类胡萝卜素标准品溶液；b制备类胡萝卜素待测样品溶液；c高效液相色谱分析；d液质联用分析，获得月季花瓣中类胡萝卜素的质谱信息；e根据保留时间、紫外可见吸收光谱图、质谱图、类胡萝卜素标准品和和文献资料对月季花瓣样品中类胡萝卜素的结构进行鉴定；f根据类胡萝卜素标准品的线性回归方程，对月季花瓣样品中的类胡萝卜素进行定量分析。本发明方法样品用量少、提取效率高、结果重复性好、数据准确可靠，是一种适合月季花瓣类胡萝卜素提取以及定性、定量分析的优良方法。

技术领域

本发明涉及类胡萝卜素的提取方法，具体地说，涉及月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取及测定方法。

背景技术

月季(Rosa spp.)是一种具有重要经济价值的观赏植物，花色是其最重要的观赏性状之一。黄色月季是月季育种史上的一大奇迹，胡萝卜素是赋予月季黄色和橙色的重要物质。

类胡萝卜素是一种由多个异戊二烯骨架串联而成的萜类化合物 (多数为C40)。由于存在共轭体系，因此在可见光下类胡萝卜素呈现黄色、橙色或红色。对植物而言，类胡萝卜素具有核心的生物学功能，例如在光合作用中对光能传递、光保护及自由基清除等方面发挥重要作用，同时胡萝卜素是合成植物激素脱落酸和独脚金内酯的前体物质。并且类胡萝卜素可赋予植物花朵、果实及种子各种颜色，对于吸引传粉者、传播种子等具有重要作用。对人类而言，类胡萝卜素是合成维生素A的前体，是一种优良的天然色素，同时在抗氧化、提高免疫力、保护视力及防癌等方面具有显著功效。月季长势健壮，适应性广、四季开花，因此月季花瓣有望成为胡萝卜素制备的重要材料。建立月季花瓣中类胡萝卜素提取及测定方法，对黄色月季育种和黄色月季中类胡萝卜素的提取利用具有重大意义。

前期检索结果显示，现有研究多数关注月季果实中类胡萝卜素的提取和测定，且存在操作步骤繁琐、样品损耗大、提取效率低等缺点。 Eugster等(1991)利用经典的纸层析技术对月季花瓣中的胡萝卜素进行分离鉴定，此方法不仅类胡萝卜素降解较多而且分离效果较差。近几年，Hodisan等(1997)、Andersson等(2011)和Horváth等(2012) 先后利用有机溶剂提取蔷薇果实中类胡萝卜素，类胡萝卜素提取液不经皂化直接用C18色谱柱进行高效液相色谱分析，其中Horváth分离出的类胡萝卜素种类最多，但是也仅有9种。因此，急需建立一种月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取和测定方法。

发明内容

本发明的目的是提供月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取及测定方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取及测定方法，包括以下步骤：

S1、称取类胡萝卜素标准品，用甲醇-甲基叔丁基醚溶液溶解，制备类胡萝卜素标准品溶液；其中，所述甲醇-甲基叔丁基醚溶液中甲醇和甲基叔丁基醚的体积比为1:1；

S2、将月季花瓣样品在液氮中迅速研磨，依次用甲醇、正己烷和正己烷-乙醚溶液振荡提取；收集有机相，挥干，得到胡萝卜素干粉；向胡萝卜素干粉中加入含有6％KOH的甲醇溶液，在黑暗条件下进行皂化反应；向皂化后的样品中加入10％NaCl水溶液，震荡后静置，然后加入正己烷-乙醚溶液振荡提取1～2次，直到残渣为白色，收集有机相，挥干，得到皂化后的胡萝卜素干粉样品；其中，所述正己烷- 乙醚溶液中正己烷和乙醚的体积比为3:1；

S3、高效液相色谱分析(HPLC)；

S4、液质联用分析(LC-MS)，获得月季花瓣中类胡萝卜素的质谱信息；

S5、根据保留时间、紫外可见吸收光谱图、质谱图、类胡萝卜素标准品和和文献资料对月季花瓣样品中类胡萝卜素的结构进行鉴定；

S6、根据类胡萝卜素标准品的线性回归方程，对月季花瓣样品中的类胡萝卜素进行定量分析。