[发明专利]月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取及测定方法

权利要求书

1.月季花瓣中类胡萝卜素的高效提取及测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、称取类胡萝卜素标准品，用甲醇-甲基叔丁基醚溶液溶解，制备类胡萝卜素标准品溶液；其中，所述甲醇-甲基叔丁基醚溶液中甲醇和甲基叔丁基醚的体积比为1:1；

S2、将月季花瓣样品在液氮中迅速研磨，依次用甲醇、正己烷和正己烷-乙醚溶液振荡提取；收集有机相，挥干，得到类胡萝卜素干粉；向类胡萝卜素干粉中加入含有6％KOH的甲醇溶液，在黑暗条件下进行皂化反应；向皂化后的样品中加入10％NaCl水溶液，震荡后静置，然后加入正己烷-乙醚溶液振荡提取，直到残渣为白色，收集有机相，挥干，得到皂化后的类胡萝卜素干粉样品；其中，所述正己烷-乙醚溶液中正己烷和乙醚的体积比为3:1；

S3、高效液相色谱分析；

S4、液质联用分析，获得月季花瓣中类胡萝卜素的质谱信息；

S5、根据保留时间、紫外可见吸收光谱图、质谱图、类胡萝卜素标准品和和文献资料对月季花瓣样品中类胡萝卜素的结构进行鉴定；

S6、根据类胡萝卜素标准品的线性回归方程，对月季花瓣样品中的类胡萝卜素进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，各步操作中使用的有机试剂中均含有0.1％BHT，整个提取过程均在避光或黄光以及温度不超过23℃的条件下进行。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2具体为：

(1)将月季花瓣样品在液氮中迅速研磨成粉末，称取0.2-0.3g样品，加入4ml甲醇，置于振荡培养箱中振荡提取20min；

(2)向(1)所得体系中加入4ml正己烷，置于振荡培养箱中振荡提取20-30min；

(3)向(2)所得体系中加入10％NaCl水溶液2ml，手动摇晃30s，静置分层，收集上层有机相；

(4)向(3)所得下层溶液中加入2ml正己烷-乙醚溶液，置于振荡培养箱中振荡提取20-30min，静置分层，收集上层有机相；用正己烷-乙醚溶液重复提取，直到残渣为白色；

(5)将(3)和(4)收集的上层有机相混合，用氮吹仪吹干，得到类胡萝卜素干粉；

(6)向类胡萝卜素干粉中加入含有6％KOH的甲醇溶液1ml，置于振荡培养箱中振荡12h，进行皂化反应；

(7)向皂化后的样品中加入10％NaCl水溶液1ml，震荡后静置，然后加入1ml正己烷-乙醚溶液，置于振荡培养箱中振荡提取1h，取出后静置分层取上清；

(8)向(7)的上清中加入0.5ml正己烷-乙醚溶液，置于振荡培养箱中振荡提取1h，取出后静置分层取上清；用正己烷-乙醚溶液重复提取，直到残渣为白色；

(9)收集(8)的有机相用真空离心浓缩仪浓缩至干燥，将皂化后的类胡萝卜素干粉置于棕色离心管中，于-80℃保存。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中先将皂化后的类胡萝卜素干粉样品用甲醇-甲基叔丁基醚溶液溶解，然后用0.22μm微孔滤膜过滤，装于2ml安捷伦上样瓶中用于高效液相色谱检测分析；其中，所述甲醇-甲基叔丁基醚溶液中甲醇和甲基叔丁基醚的体积比为1:1。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中使用的色谱柱为色谱柱为C30，规格250mm×4.6mm，5μm；流动相为：A，含0.1％BHT的甲醇；B，含0.1％BHT的甲醇-甲基叔丁基醚；C，超纯水；梯度洗脱，流速为1ml/min，进样量20μl，柱温箱温度25℃，200-600nm全波长扫描；

梯度洗脱条件为：0-2min，95％A+5％C，10min，95％A+3％B+2％C；21min，95％A+5％B；27min，90％A+10％B；37min，70％A+30％B；40min，50％A+50％B；40.01-50min，95％A+5％C。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤S3中提取450nm下的液相色谱图，同时得到每个峰对应的200-600nm紫外可见吸收光谱图。