[发明专利]一种在真核细胞中表达固氮酶基因的方法有效
| 申请号： | 201710546428.X | 申请日： | 2017-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN107338256B | 公开（公告）日： | 2021-03-30 |
| 发明（设计）人： | 程奇;孙文丽 | 申请（专利权）人： | 浙江善测禾骑士生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N9/02;C12N15/83 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 真核细胞 表达 固氮酶 基因 方法 | ||
1.一种在真核细胞中表达固氮酶基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：扩增所述固氮酶基因片段；
步骤二，构建重组载体：将所述固氮酶基因片段连接至病毒转化载体；
步骤三：用步骤二构建的重组载体转染所述真核细胞；
步骤四：筛选表达所述固氮酶基因的植物细胞；
步骤一中所述固氮酶基因片段为NifH、NifE、NifB和/或NifN；
步骤二具体为：将NifH/NifE/NifB/NifN基因，分别通过ClaI/Sa lI，EagI/SalI，EagI/SalI，ClaI/SalI酶切位点连入载体PVX表达载体PVX-HisG-MF1，得到PVX-HisG-MF1-NifH/NifE/NifB/NifN载体；
所述PVX-HisG-MF1-NifH、PVX-HisG-MF1-NifE、PVX-HisG-M F1-NifN、PVX-HisG-MF1-NifB载体的序列如SEQ ID No.13、SEQ ID No.14、SEQ ID No.15、SEQ ID No.16所示，克隆得到的NifH、NifE、NifB、NifN基因序列如SEQ ID No.9、SEQ ID No.10、SEQ ID No.11、SEQID No.12所示。
2.根据权利要求1所述的在真核细胞中表达固氮酶基因的方法，其特征在于，步骤一中扩增所述固氮酶基因片段时的引物如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ IDNo.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7及SEQ ID No.8所示。
3.根据权利要求1所述的在真核细胞中表达固氮酶基因的方法，其特征在于，步骤一中所述扩增时的PCR反应体系为：
50ul
10pmol上游引物，
10pmol下游引物，
2ul模板DNA，
4ul 2.5mM dNTP，
5ul 10倍Ex TaqTM缓冲液，
0.5ul TaKaRa Ex TaqTM
PCR反应条件：
94℃ 5分钟
94℃ 30秒，
60℃ 30秒，
72℃ 2分钟，35个循环，
72℃ 7分钟。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江善测禾骑士生物科技有限公司，未经浙江善测禾骑士生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710546428.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
