[发明专利]用于肝癌的无创诊断的特异性生物标志物组

权利要求书

1.包括至少HDGF2的多种肿瘤生物标志物在制备用于通过检测和定量来自患者血清的针对所述多种肿瘤生物标志物的自身抗体对肝癌进行诊断和分期的诊断剂中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述多种肿瘤生物标志物被制备来通过以下方法来检测和定量针对所述多种肿瘤生物标志物的自身抗体以对肝癌进行诊断和分期，所述方法包括：

将肿瘤细胞与正常细胞进行比较以评价作为所述肝癌的多个特异性生物标志物的一组蛋白，该一组蛋白在肿瘤细胞中是独特的，但在正常细胞中不是独特的；

通过使用基于二维的技术或基于质谱的技术从患者的配对活检样品中鉴定该一组蛋白；

验证用于诊断肝癌的该一组蛋白，

其中该一组蛋白从cDNA克隆表达、被纯化并偶联至具有不同发射波长的荧光微球珠以形成蛋白-珠缀合物，以及

其中存在于患者血清中的针对该一组蛋白的自身抗体与所述蛋白-珠缀合物免疫结合。

3.如权利要求2所述的用途，其中所述自身抗体随后与PE-缀合的二抗相互反应,并且对所述微球珠特异的荧光信号充当所述蛋白-珠缀合物的标识物。

4.如权利要求3所述的用途，其中测量复合物处由所述PE-缀合的二抗赋予的荧光强度以允许检测和定量所述自身抗体。

5.如权利要求2所述的用途，其中所述方法进一步包括比较患者和健康受试者之间的血清以确定针对一种或多种对应生物标志物的自身抗体的水平。

6.如权利要求2所述的用途，其中所述方法进一步包括比较获自处于不同时期的不同患者的不同血清以生成用于分期的特征谱。

7.如权利要求2所述的用途，其中该一组蛋白进一步包括SEQ ID NO.1-7和9-15的氨基酸序列中的至少一个。

8.如权利要求1所述的用途，其中所述多种肿瘤生物标志物进一步包括Bmi-1、VCC1、SUMO-4、RhoA、TXN、ET-1、UBE2C、FGF21、LECT2、SOD1、STMN4、中期因子、IL-17A和IL26中的至少一种。

9.如权利要求1所述的用途，其中所述多种肿瘤生物标志物进一步包括Bmi-1、VCC1、SUMO-4、RhoA、TXN、ET-1、UBE2C、FGF21、LECT2、SOD1、STMN4、中期因子、IL-17A和IL26。

10.如权利要求2所述的用途，其中所述肿瘤细胞包含来自肝细胞癌肿瘤的细胞。

11.如权利要求2所述的用途，其中每个所述荧光微球珠具有对每种与特异性肿瘤生物标志物的存在对应的蛋白特异的独特的荧光发射波长，其中由与每种所述特异性肿瘤生物标志物的蛋白的蛋白-珠缀合物结合的PE-缀合的二抗所生成的PE信号是在患者血清中如此产生的自身抗体的存在的指示物，并且所述PE信号的荧光强度与所述特异性肿瘤生物标志物的丰度成比例。

12.如权利要求2所述的用途，其中存在于所述自身抗体中的每种所述肿瘤生物标志物低至约0.15ng/mL。

13.至少HDGF2在制备用于通过检测和定量来自患者血清的针对多种肿瘤生物标志物的自身抗体来对肝癌进行诊断和分期的诊断剂中的用途，所述诊断剂包括一组蛋白，该一组蛋白表达自cDNA克隆、并被纯化和偶联至具有不同发射波长的荧光微球珠，以形成蛋白-珠缀合物用于免疫结合自身抗体并随后被PE-缀合的二抗靶向，使得能够测量荧光信号和强度以确定与正常受试者相比所述患者中的自身抗体的水平。