[发明专利]一种蜚蠊中原儿茶酸含量的UPLC测定方法

说明书

本发明公开了一种蜚蠊中原儿茶酸含量的UPLC测定方法，该方法包括如下步骤：蜚蠊粗粉，加水浸泡，提取三次，合并三次提取液并过滤，滤液浓缩再加入75％～95％的乙醇，弃去上层油脂，下层药液过滤，滤液回收乙醇，减压浓缩，加入甘油，再用纯化水定容，得蜚蠊醇提取物脱脂原液，用超高效液相色谱法进行检测，测定原儿茶酸的含量。本发明建立了蜚蠊醇提物中原儿茶酸的UPLC测定方法，所述的方法重复性好，稳定性高，分析速度快，为蜚蠊药材的质量控制提供了新的参考依据。

技术领域

本发明涉及中药材成分含量测定方法领域，具体涉及一种蜚蠊中原儿茶酸含量的UPLC测定方法。

背景技术

蜚蠊，亦称为美洲大蠊(Periplaneta americana)，属于昆虫纲蜚蠊目大蠊属，是重要的药用昆虫，临床上对创面的修复及愈合具有明显的促进作用，同时还具有消炎抗菌、保肝抗肿瘤、增强机体免疫力等功能。研究表明，美洲大蠊药材中除了含有大量的脂肪酸、多糖、氨基酸、多元醇以外，还含有水杨酸、原儿茶酸及核苷酸类成分。原儿茶酸是一种天然的酚酸类物质，能够抗菌抗炎镇痛，在抗氧化应激，抑制细胞凋亡、抗血小板凝集、降低心肌耗氧量、神经保护、抗肿瘤、祛痰、平喘等方面亦有突出的药理作用，临床上常用于治疗慢性气管炎。原儿茶酸也是活血化瘀类中草药中的主要活性成分。

与传统的高效液相色谱(HPLC)相比，超高效液相色谱(UPLC)具有分离度更高，分析速度更快，检测器灵敏度更高的特点。UPLC色谱柱采用粒径小于2μm的填料，显著增加了柱子的效能。与传统的C18色谱柱相比，T3柱能保证与100％水相流动相相兼容，对不同极性的化合物均有良好的保留，在分析过程中适用范围更广。

目前为止，尚没有关于测定美洲大蠊醇提物中原儿茶酸含量的HPLC及UPLC方法。本发明拟通过外标法，在超高效液相色谱(UPLC)上运用T3色谱柱建立分析美洲大蠊醇提物中原儿茶酸的方法，同时测定原儿茶酸的含量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蜚蠊中原儿茶酸的UPLC测定方法，通过确定UPLC的测定条件，对蜚蠊醇提物中原儿茶酸含量进行测定，为蜚蠊成分检测提供更加灵敏、快捷、准确的检测方法。

本发明提供了一种蜚蠊中原儿茶酸含量的UPLC测定方法，其特征在于，所述的测定方法为UPLC检测方法，该方法由以下步骤实现：

a.蜚蠊样品的制备方法：

将干燥的蜚蠊粗粉，每1kg粗粉加4kg水，浸泡1小时后，温度约在70℃，提取三次：第一次8小时，第二次加水3kg，提取6小时，第三次加水3kg，提取4小时，合并三次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为70℃时1.10～1.20，加入75％～95％的乙醇，70℃保温搅拌30分钟，静置12小时，弃去上层油脂，下层药液过滤，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为70℃时1.20～1.25，加入甘油0.5L，充分搅拌均匀，滤过，纯化水定容至10L，即得蜚蠊醇提取物脱脂原液，蜚蠊醇提物脱脂原液经13000r/min高速离心1min，取上清液过膜后，备用；

b.UPLC测定蜚蠊样品中原儿茶酸的条件：

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3柱(2.1×100mm，1.8μm)；

流动相：流动相A为缓冲盐溶液，流动相B为有机溶剂，进样量：1μL，流速：0.5mL/min，温度：样品检测温度20℃～30℃，柱温30℃～45℃，检测波长：190～450nm，洗脱时间：9～11min，洗脱程序为：99％～20％(A)：1％～80％(B)。

进一步，所述的流动相A为缓冲盐溶液，该缓冲盐溶液含0.1％甲酸和25mmol甲酸铵，流动相B为100％乙腈；

进一步，所述的检测波长为：254nm；温度：样品检测温度25℃，柱温40℃，洗脱时间：11min；