[发明专利]一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法

说明书

技术领域

本发明属于毒品检测领域，尤其是批量样本检测领域，涉及一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法。

背景技术

安非他命由盐酸麻黃素合成，能兴奋中枢神经,虽具有欣快、警觉及抑制食欲之作用，重复使用会成瘾。中毒症状包括多话、头痛、错乱、高烧、血压上升、盗汗、瞳孔放大、食欲丧失。大剂量使用引起精神错乱，思想障碍，类似妄想性精神分裂症，多疑、幻听、被害妄想等。长期使用导致器官性脑症候群，有高血压及脑中风之危险。停用之脱瘾症状包括精神呆滞、昏睡、易怒、烦躁不安、忧虑，有自杀的倾向。

目前安非他命的检测方法主要为胶体金法和色谱法。胶体金试纸条虽然检测方便，但其以吸毒人员尿液为检测对象，其灵敏度只有几百ng/ml，且每个试纸条每次只能检测一个人。色谱法虽然灵敏度高，但前处理过程时间较长，需要专门技术人员和大规模昂贵仪器。而本技术以其高灵敏度，可实现对待检人员的唾液进行毒品检测，从而避免因取尿对客体隐私的侵犯，并可实现在几分钟内进行80个样品的高通量检测。

生物膜干涉技术生物膜干涉技术(Bio-1ayer interferometry，BLI)是一种实时、无需标记的快速检测技术，其原理是当生物分子结合到传感器表面形成一层生物膜层，该生物膜层对透过传感器的光的波形造成干涉现象。干涉现象以相位移动的方式被检测，可以检测结合到传感器分子数量的变化。BLI技术已经成功应用于蛋白质分子间相互作用的检测，在小分子检测领域也有进一步研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速、高通量的检测待检人员唾液中安非他命含量的技术。所述检测方法取样方便，操作简单，检测快速，灵敏度高，在批量样品检测场合具有重要的应用价值。

本发明的目的由以下技术方案实现：

一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法，包括如下步骤：

步骤(1)：胶体金的制备。避光条件下，取一定体积的超纯水于磁力搅拌器上加热至80-90℃,按100:2的体积比加入氯金酸溶液继续加热至沸腾,再快速加入2％体积的柠檬酸三钠溶液，保持沸腾反应10min后，冷却至室温后，采用分光光度计检测520-530nm处的吸光度；

所述的氯金酸溶液的质量分数为1％；柠檬酸三钠溶液的质量分数为1％；

所述的胶体金的粒径为30-40nm左右，在525nm波长下有最大吸光度值；

步骤(2)：金标抗体的制备。取一定体积的胶体金溶液,用碳酸钾溶液调节pH至7.2-7.4，室温搅拌10-20min；按100:1-2的体积比加入1mg/mL的安非他命单克隆抗体,室温搅拌20-30min；加入质量分数为10％的BSA溶液使其终浓度为1％；室温搅拌20-30min；4-8℃，12000rpm离心20-30min；弃上清液，留沉淀；沉淀用等体积的PBS缓冲液溶解，得到安非他命金标抗体溶液；

所述的碳酸钾溶液浓度为0.2M；安非他命单克隆抗体为购买的鼠源单克隆抗体；BSA(牛血清白蛋白)溶液封闭抗体未结合的位置；PBS缓冲液的pH为7.4；

步骤(3)：光纤生物传感器的制备。将APS光纤传感器的检测端没入安非他命-BSA溶液中，室温静置20-30min；再将APS光纤生物传感器没入质量含量为10％的BSA溶液中，室温静置20-30min；再将光纤生物传感器没入蔗糖溶液中，室温静置20-30min；室温晾干，置于2～8℃干燥保存；

所述的APS光纤传感器是用无水乙醇配置的0.5-2M的APS(Aminopropyls-ilane,氨基丙基硅烷)浸泡普通空白光纤传感器的检测端12小时并干燥后制得的，处理后的光纤探头表面能通过蛋白的氨基固定蛋白分子；

安非他命-BSA为安非他命完全抗原，即在BSA表面偶联了安非他命分子，可购买获得；安非他命-BSA溶液浓度为50-100μg/mL；

蔗糖溶液浓度为15％(质量含量)；

步骤(4)：待测样品准备。用棉签沾取待检人员下牙床内的唾液后，将棉签插入含有0.5-1mL溶液的EP管中并旋转混匀后弃掉棉签；EP管内的溶液待用；

所述的棉签为医用一次性棉签，EP管内的溶液为步骤(2)制得的安非他命金标抗体溶液，EP管内的溶液作为后续检测的样品；