[发明专利]一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法

权利要求书

1.一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

步骤(1)、金标抗体的制备

将胶体金溶液调节pH至7.2-7.4，室温下搅拌10-20min；按100:1-2的体积比加入1mg/mL的安非他命单克隆抗体,室温下搅拌20-30min,加入质量分数为10％的BSA溶液使其终浓度为1％，室温下搅拌20-30min；然后4-8℃温度下离心,弃上清液，留沉淀；沉淀用等体积的PBS缓冲液溶解，得到安非他命金标抗体溶液；

所述的胶体金的粒径为30-40nm左右，在525nm波长下有最大吸光度值；

步骤(2)：待测样品准备

用棉签沾取待检人员内的唾液后，置于0.5-1mL步骤(2)制得的安非他命金标抗体溶液中，并旋转混匀后弃掉棉签，得到所需的待测样品；

步骤(3)、样品检测

采用ForteBio Octet Red生物分子相互作用仪对步骤(2)待测样品进行检测，检测过程如下：

①将再生平衡后的APS光纤传感器检测端浸没在步骤(2)待测样品中60-100s进行检测；

②将检测后的APS光纤传感器检测端再次再生平衡；

③将检测结果代入安非他命浓度的标准曲线中，获得待测样品中安非他命的浓度。

2.如权利要求1所述的一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法，其特征在于所述的安非他命浓度的标准曲线是采用ForteBio Octet Red生物分子相互作用仪对安非他命梯度标准品溶液进行检测，绘制标准曲线；具体过程为

①多个APS光纤传感器的检测端浸没在PBS缓冲液中30-100s进行平衡；

②平衡后的光纤传感器的检测端分别浸没在0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的安非他命标准品溶液中60-100s进行梯度标准品的检测，根据检测结果，绘制标准曲线，再对标准品浓度做10为底的对数转换，得出标准品浓度和检测信号之间的函数关系。

3.如权利要求1所述的一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法，其特征在于所述的APS光纤传感器的再生平衡过程是将APS光纤传感器的检测端浸没在甘氨酸-盐酸缓冲液中30-100s进行再生；再生后的光纤传感器的检测端浸没在PBS缓冲液中30-100s进行平衡。

4.如权利要求1或2或3所述的一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法，其特征在于所述的APS光纤生物传感器的制备过程如下：

1)采用0.5M APS乙醇溶液浸泡普通空白的光纤生物传感器检测端12小时并干燥；其中处理后传感器的检测端表面能通过蛋白的氨基固定蛋白分子；

2)将上述处理后传感器的检测端浸没在安非他命-BSA溶液中，室温静置20-30min；

3)将上述处理后传感器的检测端浸没在质量含量为10％的BSA溶液中，室温静置20-30min；

4)将上述处理后传感器的检测端浸没在蔗糖溶液中，室温静置20-30min；

5)室温晾干，置于2～8℃干燥保存；

安非他命-BSA为安非他命完全抗原，即在BSA表面偶联了安非他命分子。

5.如权利要求3所述的一种基于生物膜干涉技术的安非他命检测方法，其特征在于安非他命-BSA溶液浓度为50-100μg/mL。