[发明专利]一种检测乙二胺四乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法

说明书

本发明涉及一种检测乙二胺四乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法，胶体金试纸，包括反应膜、样本垫、结合物释放垫、吸水垫和背衬，其特征在于，所述反应膜上具有包被乙二胺四乙酸‑载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区，所述结合物释放垫包被乙二胺四乙酸单克隆抗体‑胶体金标记物；将待测样品滴入试剂卡孔内，当乙二胺四乙酸及其螯合物在样品中浓度低时，胶体金抗体在层析过程中会被固定在反应膜上的乙二胺四乙酸偶联物结合，在测试区质控区内会出现各一条红色条带；浓度高时，则反之；本发明能准确且灵敏的检测乙二胺四乙酸及其螯合物。

技术领域

本发明涉及一种胶体金试纸，具体的说是一种检测乙二胺四乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法。

背景技术

乙二胺四乙酸(EDTA)是个含有羧基和氨基的螯合剂，它具有广泛的配位能力，几乎能与所有过渡重金属离子生成稳定的水溶性螯合物。由于EDTA的结构特点，现已广泛地应用在化学分析和工业生产中。由于EDTA的结构特点，它能与50多种金属离子形成可溶性的螯合物，是一种高效螯合剂，尤其与一些有害金属离子形成的螯合物的稳定性极好。

EDTA 的生物降解性能较差，另外，EDTA 会长时间吸附于土壤颗粒上，EDTA 在土壤中残留期可能较长。EDTA 使用可能带来的环境风险主要表在以下几个方面：第一，EDTA可能导致土壤养分及矿质元素（K、Fe、Ca、Mn）的流失；第二，EDTA 的加入导致重金属活化，致使重金属更容易迁移，引起地表水、深层土壤、地下水等的二次污染；第三，EDTA 对土壤微生物、植物可能存在生物毒害；第四，EDTA 在土壤中的残留及其潜在风险。

随着EDTA的广泛应用，含有微量EDTA的工业废水流入江河湖泊，在环境中主要以重金属螯合物形式存在，这些重金属螯合物为有害和难解离物质，造成重金属的扩散，严重地污染了环境。近年来被发现明显富集在瑞士、德国、美国的河流和湖泊中。这些自然水中的EDTA来源于一些工业洗涤制品、摄影业制品等工厂。由于在自然水中EDTA和金属离子是络合存在的，所以河水中EDTA与重金属的富集程度是相一致的。由于EDTA的性质，使它成为重金属的保护伞，使得在自然水中重金属的富集对环境造成污染，这些已引起国内外环保部门的重视。瑞士的洗涤品协会已通过一项决议，即洗涤品中将不允许含有EDTA。它对水环境造成的污染，越来越引起人们的重视，已成为一个世界性的问题。并且EDTA随工业废水的排放和许多有害重金属形成配合物，增大了重金属的可溶性，造成重金属的扩散，危害较大，已引起国内外环境监测人员的重视。

另外，在人体内不能被分解而排出体外，可引起人体缺钙，也可引起暂时性血压下降，肾脏功能障碍，所以EDTA在人体内的蓄积会危害健康。我国规定罐头食品中EDTA二钠盐的最大使用量为0.25 g/kg。

目前，乙二胺四乙酸及其螯合物的检测方法有滴定法、高效液相色谱法(HPLC)。但这些方法检测费时费力且成本高，与其它检测系统相比，一次检测样品量少，检测时间长，不适合现场快速检测，仅作为少数实验室的确证方法，满足不了环境和农产品检测快速简便的需要。

而基于乙二胺四乙酸特异性抗体的免疫检测方法为其检测提供了一种新的策略。免疫法目前越来越受到重视，因其检测限低，单个样品检测成本低（如ELISA法），尤其适合应用于大批样品的检测，尤其是免疫层析法，检测速度快，灵敏度高，与HPLC、GC-MS检测有较高一致性，而且非常适合活体动物的检测。而且成本低，无需大型仪器，而且可以直接对尿液、饲料、洗涤剂、水样等样品进行检测，适用于现场检测。但是，目前还没有检测乙二胺四乙酸及其螯合物的商品化的试剂盒和试纸条。因此，研究和建立具有我国自主知识产权的乙二胺四乙酸及其螯合物免疫学检测方法，对提高我国环境和农产品乙二胺四乙酸及其螯合物控制和监测水平，保障环境及农产品质量安全和消费者的健康具有重要意义。

发明内容

本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种检测乙二胺四乙酸及其螯合物的胶体金试纸及其制备和检测方法，能准确且灵敏的检测乙二胺四乙酸及其螯合物。