[发明专利]一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法

说明书

本发明公开了一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，属于生物领域，以解决现有方法存在愈伤组织诱导中褐化严重、不易分化的问题。一种蒙古沙冬青离体快速繁殖的方法，包括蒙古沙冬青外植体的获得、丛生芽的诱导培养、丛生芽的伸长培养、生根培养、扩大繁殖步骤。本发明与现有的蒙古沙冬青离体培养相比，取子叶节这个部位直接进行丛生芽的诱导，再生根。这个过程不发生愈伤组织从而减少了愈伤组织诱导的步骤，通过子叶节直接培育成不定芽，极大地缩短了离体培养的时间，整个过程从种子萌发、子叶节的获得、丛生芽的诱导与伸长到生根仅需79d。

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法。

背景技术

蒙古沙冬青，又称大沙冬青，属豆科沙冬青属。主要分布于内蒙古、甘肃、宁夏等地的荒漠地区。它对环境条件适应能力极强，是我国北方荒漠地区唯一一种强旱生常绿阔叶灌木，也是阿拉善荒漠区特有的建群植物，对防沙固沙、防止水土流失、维持当地生态平衡起着重要的作用，具有重要的经济意义和资源价值。但蒙古沙冬青狭小的分布范围和近年来人类活动的破坏，其数量正在不断减少，现已濒临灭绝，被列为国家三级保护植物。蒙古沙冬青自然更新力弱，实生苗移植生根困难，因此采用组织培养的方式进行离体快速繁殖是保护蒙古沙冬青这种珍稀濒危种质资源、解决该物种自然更新能力弱、繁殖困难等问题的有效手段之一。

蒙古沙冬青的离体培养技术始于上世纪80年代。一般采用无菌育苗的方式获得子叶、胚轴或小茎段，选用不同的培养基进行愈伤组织与芽的诱导分化。最早是在1988年，丁晓莉诱导出了愈伤和芽点。慈忠玲等在1994年对愈伤组织和体细胞胚发生过程做过研究，但体细胞胚中途退化，未能发育为完整的植株。1997年蒋志荣等选用无菌苗茎段进行试验,得到了比较合适的诱导芽和根的激素配比。2000年，何丽君等通过对沙冬青无菌实生苗不同部位的外植体进行愈伤组织诱导，直接得到了再生植株，转入到生根培养基中形成完整植株。

近年，有王方琳等在2016年以蒙古沙冬青无菌苗的子叶、茎段为外植体材料，研究了不同激素配比的培养基对不同外植体愈伤组织培养、丛生芽增殖及生根培养的影响，筛选出了适宜各阶段培养的最佳培养基配方。通过部分组织如将子叶切成小片进行愈伤组织培养，再进行芽的诱导与生根以体细胞胚胎发生的方式进行的再生植株诱导，在培养过程中存在许多问题如愈伤组织不易分化且褐化严重，不能多次继代，分化的芽有玻璃化现象，有的虽然也能壮苗生根，却达不到快速繁育等问题。迄今，针对蒙古沙冬青没有经过器官培养途径进行离体快速繁殖的研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，以解决现有方法存在愈伤组织诱导中褐化严重、不易分化的问题。

为了使蒙古沙冬青这种生态意义巨大的树种在野外繁殖资源缺少的情况下，能够成功进行繁殖使之能够保存和可持续利用，并能够避免传统的离体培养中存在的诸多问题，缩短培养周期，研发了本发明珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法。

本发明技术方案如下：一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，包括如下步骤：

A、蒙古沙冬青外植体的获得：

取消毒的蒙古沙冬青种子，在无菌条件下接种到含2.0mg/L 6-BA的MS培养基中，黑暗培养7-11d后，切取萌发幼苗的两片子叶节作为外植体；

B、丛生芽的诱导培养：将所述步骤A中得到的外植体近轴面朝上，倾斜插入B₅培养基中，黑暗培养，然后用辅助光诱导15—20d；

C、丛生芽的伸长培养：

从子叶节处诱导出丛生芽后，剔除剩余子叶，转接于B₅培养基中，黑暗培养，然后用辅助光下伸长培养20—25 d；

D、生根培养：