[发明专利]一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法

权利要求书

1.一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于包括如下步骤：

A、蒙古沙冬青外植体的获得：

取消毒的蒙古沙冬青种子，在无菌条件下接种到含2.0mg/L 6-BA的MS培养基中，黑暗培养7-11d后，切取萌发幼苗的两片子叶节作为外植体；

B、丛生芽的诱导培养：将所述步骤A中得到的外植体近轴面朝上，倾斜插入B₅培养基中，黑暗培养，然后用辅助光诱导15—20d；所述步骤B中丛生芽诱导培养基为含1.0 mg/L 6-BA的B₅培养基；

C、丛生芽的伸长培养：

从子叶节处诱导出丛生芽后，剔除剩余子叶，转接于B₅培养基中，黑暗培养，然后用辅助光下伸长培养20—25 d；所述步骤C中伸长培养基为含1.0 mg/L 6-BA和0.2-0.3mg/LIAA的B₅培养基；

D、生根培养：

将所述步骤C中长度为2-3cm的丛生芽单株切下转接到B₅培养基中培养7-10d后，转接入B₅培养基生根培养基中诱导20—30d；所述步骤D中生根培养基为含1.0-2.0mg/LIBA的1/2B₅培养基；

E、扩大繁殖：

切割所述步骤D中获得的完整植株的带腋芽的茎段，转入到含1.0mg/L 6-BA和0.2-0.3mg/LIAA的B5培养基，黑暗培养，然后用辅助光下伸长培养20—25d；待植株生长到2-3cm，转接入含1.0-2.0mg/LIBA的1/2 B₅培养基中诱导生根30—40d。

2.根据权利要求1所述的一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于：所述步骤A蒙古沙冬青外植体的获得具体步骤为，取萌发的幼苗，上胚轴粗度为3-5mm，保留子叶近胚轴的分生组织部分2-5mm和上胚轴2-4mm，切去了其余部分，然后在两片子叶中间沿胚轴纵向切开，去掉了腋芽，在子叶与胚轴交接处切开2—4个伤口，得到两个子叶节外植体。

3.根据权利要求1所述的一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于：所述步骤A、步骤B和步骤C中黑暗培养温度为，白天22-26℃，夜间17-21℃。

4.根据权利要求1所述的一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于：所述步骤B、步骤C、步骤D、步骤E中黑暗培养时间为5-7d。

5.根据权利要求1所述的一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于：所述步骤B和C中辅助光的光周期为14 h/d，光强为1000-1500Lux。

6.根据权利要求1所述的一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于：所述步骤C中丛生芽特征为，芽丛生，芽数清晰，芽平均长0.3-0.5mm。

7.根据权利要求1所述的一种珍稀濒危植物蒙古沙冬青离体快繁的方法，其特征在于：所述步骤D中丛生芽的特征为：丛生芽的平均长度为2-3cm。