[发明专利]一种用于检测疾病的组合物及其试剂盒和用途

说明书

本发明提供了一种检测疾病的组合物，本发明的组合物包括用于体外检测组织特异性甲基化基因标识物的核酸和用于体外检测与疾病相关的甲基化基因标识物的核酸，本发明提供的组合物能够敏感和特异性地检测疾病，并区分疾病的病变位置。本发明还提供了包含所述组合物的试剂盒、基于该试剂盒来执行检测的方法、及用途。使用本发明的组合物和方法，将组织特异性甲基化基因标识物的检测与“液相活检”结合，一方面能够揭示人体病变(例如：癌症)的发生和存在，另一方面能够对病变位置进行判断，为后续诊断和治疗提供重要的指导信息。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种组合物及其在疾病检测中的用途，具体地涉及一种基于组织特异性甲基化基因标识物检测疾病的组合物及其相应的试剂盒和用途。

背景技术

DNA甲基化是DNA修饰途径之一：在DNA甲基转移酶的催化下，DNA的CG双核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶。DNA甲基化具有重要的生物学功能和意义；大量研究表明：DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达、决定细胞的性状。

通过对基因组DNA进行甲基化修饰来调控基因表达是细胞分化和个体发育过程中的一种重要分子生物学机制。人体所有组织中的细胞来源于受精卵，含有相同的遗传物质(基因组DNA)。但是，不同组织类型的细胞在形态和功能上存在显著差异。不同组织类型细胞的分化及其性状的维持是通过一系列基因的表达调控实现的。在这个复杂的调控过程中，DNA甲基化发挥了重要作用：每一种组织类型的细胞通过对特定基因DNA进行甲基化修饰，激活和抑制这些基因的表达，从而实现不同组织类型的细胞的分化和分化后细胞形态和功能的维持。因此，虽然不同组织类型细胞的基因组DNA的序列是相同的，但是其基因组DNA的甲基化程度和水平是不同的，是具有组织特异性的。每一种组织类型的细胞具有一组呈现组织特异性的甲基化基因。这些基因被称为组织特异性甲基化基因，或组织特异性甲基化基因标识物。

组织特异性是组织特异性甲基化基因标识物的重要特性，也赋予了这类标识物对细胞组织来源的指向性。这种组织来源的指向性在临床检验领域有重要作用，尤其是针对近年来快速发展的“液相活检”，组织来源的指向性更具有明显的临床价值。“液相活检”是通过对外周血中游离核酸的检测；由于外周血中游离核酸可能来自人体任何一种组织细胞，因此对外周血中异常游离核酸的检测只能提示人体中病变的发生和存在，但无法提供判断外周血中异常游离核酸组织来源(即：病变的位置)的信息。以“液相活检”Septin9基因(SEPT9)甲基化DNA为例：SEPT9基因甲基化DNA是一种具有高灵敏性的大肠癌标识物；通过“液相活检”检测外周血中SEPT9基因甲基化DNA的状态和水平，可以判断受测个体是否患有大肠癌；同时，研究发现肝癌患者外周血中也含有SEPT9基因甲基化DNA；因此，单独进行SEPT9基因甲基化DNA的检测虽然能够判断受测人是否患有癌症，但是无法区分患者的癌症是大肠癌、还是肝癌。

基于此，当前对能够特异性区分受试者疾病的组合物存在需求。

发明内容

针对现有“液相活检”技术缺乏组织类型指向性的问题，本发明提供了一种检测疾病的组合物，本发明的组合物包括用于体外检测组织特异性甲基化基因标识物的核酸和用于体外检测与疾病相关的甲基化基因标识物的核酸，本发明提供的组合物能够敏感和特异性地检测疾病，并区分疾病的病变位置。本发明还提供了包含所述组合物的试剂盒、基于该试剂盒来执行检测的方法、及用途。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种用于检测疾病的组合物，所述组合物包括用于体外检测组织特异性甲基化基因标识物的核酸和用于体外检测与疾病相关的甲基化基因标识物的核酸。

优选地，所述组织特异性甲基化基因标识物选自肝特异性甲基化基因标识物、肺特异性甲基化基因标识物、大肠特异性甲基化基因标识物、食道特异性甲基化基因标识物、肾特异性甲基化基因标识物、膀胱特异性甲基化基因标识物、前列腺特异性甲基化基因标识物、子宫颈特异性甲基化基因标识物或乳腺特异性甲基化基因标识物中的一种或多种；